Gli anticorpi sono serviti dall'uso di farmaci. Immunoterapia: meccanismo d'azione e uso clinico dei farmaci immunocorrettivi

Preparazioni immunobiologiche

per la diagnosi, la prevenzione e

trattamento delle malattie infettive

Yurova V.A., Butakova L.Yu., Kraft L.A., Kuklina N.V., Sazanskaya A.A., Karabasova E.B., Vinnikova Yu.V., Ilinskaya B.V., Prokopyev V. .IN.

Firmato per la stampa su carta offset. Tiratura: 500 copie.

Stampato nella tipografia: :;

Istituzione educativa statale di istruzione professionale superiore Università medica statale di Altai dell'Agenzia federale per la salute e lo sviluppo sociale.

Preparazioni immunobiologiche

per la diagnosi, la prevenzione e

trattamento delle malattie infettive

Un libro di testo per l'autopreparazione degli studenti esercizi pratici nella microbiologia

Barnaul, 2011

Revisori:

Il libro di testo delinea questioni teoriche riguardanti la natura e l'uso dei preparati immunobiologici - diagnostici, terapeutici e profilattici: vaccini, sieri, batteriofagi, ecc.

Studenti della facoltà profilo medico(terapeutici, pediatrici, odontoiatrici) richiedono uno studio più approfondito dei meccanismi d’azione dei farmaci batteriologici, risposta l'organismo alla somministrazione di vaccini e farmaci sierici, complicazioni che si verificano quando si utilizzano determinati farmaci.

Preparati immunobiologici per la diagnosi, la prevenzione e il trattamento delle malattie infettive: Yurova V.A., Butakova L.Yu., Kraft L. .UN., Kuklina N.V., Sazanskaya A.A., Karabasova E.B., Vinnikova Yu.V., Ilinskaya B.V. - Barnaul, 2002. - 46 p.

A.A., Karabasova E.B., Vinnikova Yu.V., Ilinskaya B.V., 2002

Nella prevenzione, diagnosi e cura delle malattie infettive sono ampiamente utilizzati preparati immunobiologici costituiti da microrganismi vivi e uccisi (batteri, rickettsie, virus), dai loro prodotti metabolici (tossine), nonché da singoli antigeni cellulari microbici estratti da vari metodi. Sieri e gammaglobuline e immunoglobuline specifiche vengono utilizzati anche a scopo terapeutico e diagnostico. Inoltre, i preparati di batteriofagi sono ampiamente utilizzati per scopi diagnostici e terapeutici.

Le informazioni sulla composizione, preparazione e meccanismo d'azione dei farmaci immunobiologici sono necessarie al medico nelle sue attività pratiche. Allo stesso tempo, i professionisti non hanno sempre l'opportunità di familiarizzare con i preparati di vaccini e sieri di nuova creazione e le caratteristiche del loro utilizzo. Inoltre, i libri di testo moderni non riflettono pienamente le questioni relative alla preparazione, al meccanismo d'azione e all'uso dei farmaci immunobiologici.

Tutto ciò ha portato alla necessità di creare un libro di testo contenente informazioni sui farmaci immunobiologici. Questo manuale contiene informazioni sulla ricetta, sul principio attivo, sull'uso dei farmaci immunobiologici e sulle complicazioni che si verificano durante l'uso di alcuni di essi. Il manuale ha lo scopo di preparare gli studenti del terzo anno delle facoltà di medicina, pediatria, odontoiatria e medicina preventiva per lezioni pratiche di microbiologia privata.

Classificazione dei preparati immunobiologici

I.Farmaci diagnostici.

Preparati contenenti antigeni: diagnostici, allergeni, tossine.

Preparati contenenti anticorpi - sieri diagnostici.

Batteriofagi diagnostici.

II. Farmaci terapeutici e profilattici.

Preparati contenenti antigeni - vaccini.

Preparati contenenti anticorpi - sieri curativi e gammaglobuline e immunoglobuline.

Batteriofagi.

Microbi antagonisti.

Interferoni e altre citochine.

Sezione I

Farmaci diagnostici

I farmaci diagnostici vengono utilizzati nella diagnosi di laboratorio di una serie di malattie, la cui diagnosi accurata può essere effettuata solo mediante studi batteriologici e virologici. Inoltre, i farmaci diagnostici sono necessari quando si conferma con metodi di laboratorio la diagnosi di una malattia che ha un decorso atipico o di una malattia caratterizzata da polimorfismo dei sintomi. Inoltre, la diagnosi di malattie non riscontrate nel territorio in questione e in tempo a disposizione, deve essere confermato con metodi di laboratorio.

Le tecniche diagnostiche microbiologiche sono ampiamente utilizzate nella diagnosi delle malattie infettive. In questo caso vengono utilizzati metodi diagnostici batteriologici, virologici, sierologici, allergici, immunologici, nonché metodi di ibridazione molecolare e PCR. Per ognuna di queste metodiche sono necessarie alcune preparazioni immunobiologiche diagnostiche: diagnosticum, sieri diagnostici (specie, tipo, complesso, adsorbito, ecc.), complemento, allergeni, batteriofagi, sistemi per RIF ed ELISA, sonde di acido nucleico.

Classificazione dei farmaci diagnostici

1. Preparati contenenti anticorpi - sieri diagnostici:

agglutinante;

precipitare;

antitossico;

emolitico;

antivirale;

luminescente;

antiglobulina.

2. Preparati contenenti antigeni:

2.1) diagnostici:

2.1.1.batterico;

2.1.2.eritrociti;

2.1.3.virale;

2.2.) tossine;

2.3.)allergeni.

3. Batteriofagi diagnostici.

1. Sieri diagnostici

Sono ampiamente utilizzati nella diagnosi delle malattie infettive. reazioni immunitarie per identificare microrganismi (batteri e virus) o tossine. Per eseguire tali reazioni sono necessari sieri diagnostici specifici.

1.1. Sieri agglutinanti.

I sieri agglutinanti si ottengono immunizzando conigli con una sospensione di microrganismi uccisi o dei loro antigeni, quindi prelevando il loro sangue e preparando il siero. I sieri agglutinanti vengono utilizzati per identificare i microrganismi in una reazione di agglutinazione. Lo svantaggio di tali sieri è che sono in grado di dare reazioni di agglutinazione di gruppo, perché contengono anticorpi contro batteri che hanno antigeni comuni. Pertanto, oggigiorno viene utilizzata la maggior parte dei sieri adsorbito, I sieri adsorbiti contengono solo anticorpi tipici o specifici corrispondenti a un tipo specifico o tipo di antigene. Per ottenere tali sieri viene utilizzato il metodo Castellani, il metodo di adsorbimento. Questo metodo consiste nel depletare il siero delle agglutinine del gruppo saturandolo con batteri eterogenei correlati. In questo caso, si verifica l'adsorbimento degli anticorpi del gruppo e gli anticorpi specifici rimangono nel siero. In questo modo è possibile ottenere sieri monorecettoriali, sieri contenenti anticorpi contro un solo antigene, e sieri polivalenti che danno reazioni di agglutinazione con due o tre batteri affini che hanno un antigene comune. Il titolo di un siero agglutinante è la diluizione più alta alla quale avviene la reazione di agglutinazione.

I sieri agglutinanti sono ampiamente utilizzati, ad esempio, nella diagnosi di malattie causate da Escherichia, Salmonella e altri membri della famiglia delle Enterobacteriaceae.

1.2. Sieri precipitanti.

I sieri precipitanti si ottengono immunizzando conigli con antigeni batterici, loro estratti e tossine. Il titolo del siero precipitante è la diluizione massima dell'antigene alla quale avviene la reazione di precipitazione. I sieri precipitanti vengono prodotti con un titolo elevato, non inferiore a 1:100.000. Ciò è dovuto al fatto che l'antigene determinato nella reazione di precipitazione ha una struttura finemente dispersa e un volume unitario può contenere più anticorpi dello stesso volume di anticorpi sierici.

Sieri precipitanti specifici vengono utilizzati nella diagnosi delle malattie infettive ( antrace, peste, tularemia, difterite, ecc.), nella visita medico legale per determinare la specie delle proteine, nella pratica sanitaria per rilevare la conformità delle sostanze proteiche nei prodotti (se si sospetta una falsificazione).

La reazione di precipitazione può essere organizzata come reazione di precipitazione su anello o reazione di precipitazione su gel.

1.3. Sieri emolitici.

I sieri emolitici si ottengono immunizzando conigli con una sospensione di eritrociti di pecora. Il titolo sierico è la massima diluizione che, in presenza di complemento, provoca un'emolisi del 3% di una sospensione di globuli rossi di pecora. I sieri emolitici vengono utilizzati per la titolazione del complemento e durante l'esecuzione della reazione di fissazione del complemento nel sistema indicatore.

1.4. Sieri antivirali.

I sieri antivirali immunitari si ottengono immunizzando vari animali a seconda del tipo di virus. Ad esempio, il siero contro gli adenovirus si ottiene immunizzando i conigli, il siero contro il virus dell'influenza si ottiene immunizzando i furetti bianchi, ecc.

I sieri antivirali diagnostici vengono utilizzati per determinare il tipo o il tipo di virus in RTGA, RSK., RN.

1.5.Sieri luminescenti. I sieri luminescenti sono sieri immuni contenenti anticorpi specifici marcati con coloranti fluorescenti. Durante la preparazione dei sieri luminescenti, diversi fluorocromi vengono aggiunti alla frazione globulinica del siero immunitario attraverso forti legami chimici. I sieri luminescenti vengono utilizzati durante l'esecuzione del RIF.

1.6. Siero antiglobulina.

Il siero antiglobulina (AGS) contiene anticorpi contro le immunoglobuline provenienti da siero umano o di coniglio, a seconda del siero immunitario utilizzato nella reazione. L'AGS si ottiene immunizzando gli animali con immunoglobuline umane o di coniglio. Tali sieri vengono utilizzati per eseguire RIF indiretto, reazione ELISA e reazione di Coombs.

Immune ai farmaci anemia emolitica rappresenta circa il 20% di tutte le anemie immunoemolitiche acquisite. Nella maggior parte delle altre anemie immunoemolitiche indotte da farmaci, gli anticorpi sono diretti contro il complesso glicoproteico farmaco-membrana. L'emolisi si osserva solo durante l'assunzione del farmaco e di solito si interrompe rapidamente dopo la sua sospensione.

Formazione di complessi immunitari. Gli immunocomplessi costituiti da un farmaco e un anticorpo si legano in modo aspecifico alle membrane degli eritrociti, seguito dall'attivazione del complemento. Un test di Coombs diretto con anticorpi del complemento è solitamente positivo, mentre con anticorpi IgG è negativo. Gli anticorpi contro il farmaco possono essere rilevati incubando il siero del paziente con globuli rossi normali in presenza di complemento e questo farmaco. La maggior parte dei casi di anemia immunoemolitica indotta da farmaci sono causati da questo meccanismo (Tabella 16.3). Prescrizione ripetuta del farmaco anche in piccola dose provoca emolisi intravascolare acuta, manifestata da emoglobinemia, emoglobinuria e insufficienza renale acuta.

Nell'emolisi causata da autoanticorpi, il recupero è più lento (di solito diverse settimane). Il test di Coombs può rimanere positivo per 1-2 anni.

I farmaci che causano l’anemia emolitica immunitaria sono divisi in due gruppi a seconda del loro meccanismo d’azione.

Il primo include

Classificazione dei farmaci contenenti anticorpi

Sieri curativi.

Immunoglobuline.

Gammaglobuline.

Preparati al plasma.

Esistono due fonti per ottenere preparati di siero di latte specifici:

iperimmunizzazione di animali (preparazioni di siero eterologo);

vaccinazione del donatore (farmaci omologhi).

2.1. Preparazioni di siero eterologhe.

Gli animali di grossa taglia, i cavalli, vengono utilizzati principalmente per la produzione di preparazioni di siero eterologhe. I cavalli hanno un'elevata reattività immunologica e in un tempo relativamente breve è possibile ottenere da loro siero contenente anticorpi ad alto titolo. Inoltre, l'introduzione delle proteine del cavallo nell'uomo provoca il minor numero di reazioni avverse. Raramente vengono utilizzati animali di altre specie. Gli animali idonei all'uso all'età di 3 anni e oltre sono soggetti a iperimmunizzazione, cioè il processo di somministrazione ripetuta di dosi crescenti di antigene al fine di accumulare la quantità massima di anticorpi nel sangue degli animali e mantenerlo a un livello sufficiente il più a lungo possibile. Durante il periodo di massimo aumento del titolo anticorpi specifici Nel sangue degli animali vengono eseguiti 2-3 salassi con un intervallo di 2 giorni. Il sangue viene prelevato dalla vena giugulare in ragione di 1 litro per 50 kg di peso del cavallo in una bottiglia sterile contenente un anticoagulante. Il sangue ottenuto dai cavalli in produzione viene trasferito al laboratorio per ulteriori elaborazioni. Il plasma viene separato dagli elementi formati in separatori e defibrinato con una soluzione di cloruro di calcio. L'uso di siero intero eterologo è accompagnato da reazioni allergiche sotto forma di malattia da siero e anafilassi. Un modo per ridurre le reazioni avverse dei farmaci sierici, oltre ad aumentarne l'efficacia, è purificarli e concentrarli. Il siero di latte viene purificato dalle albumine e da alcune globuline, che non sono frazioni immunologicamente attive delle proteine del siero di latte. A questa frazione appartengono le pseudoglobuline con mobilità elettroforetica tra le globuline gamma e beta, gli anticorpi antitossici. Inoltre, le frazioni immunologicamente attive includono gammaglobuline; questa frazione include anticorpi antibatterici e antivirali; La purificazione dei sieri dalle proteine di zavorra viene effettuata utilizzando il metodo Diaferm-3. Quando si utilizza questo metodo, il siero di latte viene purificato mediante precipitazione sotto l'influenza del solfato di ammonio e mediante digestione peptica. Oltre al metodo Diaferm 3, ne sono stati sviluppati altri (Ultraferm, Alcoholferm, immunosorbimento, ecc.) che hanno un uso limitato.

Il contenuto di antitossina nei sieri antitossici è espresso in unità internazionali (UI) adottate dall'OMS. Ad esempio, 1 UI di siero antitetanico corrisponde alla sua quantità minima che neutralizza 1000 dosi letali(DLm) di tossina tetanica per una cavia del peso di 350 g. 1 ME di antitossina antibotulinica è la quantità più piccola di siero che neutralizza 10.000 DLm di tossina botulinica per topi del peso di 20 g. 1 ME di siero antidifterite corrisponde alla sua quantità minima che neutralizza 100 DLm di tossina difterica per una cavia del peso di 250 g.

Nelle preparazioni immunoglobuliniche, le IgG sono il componente principale (fino al 97%). lgA, IgM, IgD sono incluse nel farmaco in quantità molto piccole. Vengono prodotte anche preparazioni di immunoglobuline (IgG) arricchite con IgM e IgA. L'attività del farmaco immunoglobulinico è espressa nel titolo di anticorpi specifici, determinati da una delle reazioni sierologiche ed è indicata nelle istruzioni per l'uso del farmaco.

I preparati sierici eterologhi vengono utilizzati per il trattamento e la prevenzione di malattie infettive causate da batteri, loro tossine e virus. L'uso tempestivo e precoce del siero può prevenire lo sviluppo della malattia, il periodo di incubazione è prolungato, la malattia emergente ha un decorso più lieve e la mortalità è ridotta.

Uno svantaggio significativo dell'utilizzo di preparati di siero di latte eterologhi è il verificarsi di sensibilizzazione del corpo a una proteina estranea. Come indicano i ricercatori, più del 10% della popolazione in Russia è sensibilizzata alle globuline del siero di cavallo. A questo proposito, la somministrazione ripetuta di farmaci sierici eterologhi può essere accompagnata da complicazioni sotto forma di varie reazioni allergiche, la più pericolosa delle quali è lo shock anafilattico. Per identificare la sensibilità del paziente alle proteine del cavallo, viene eseguito un test intradermico con siero di cavallo diluito 1:100, appositamente preparato per questo scopo. Prima di somministrare il siero terapeutico, 0,1 ml diluito siero di cavallo e osservare la reazione per 20 minuti.

2.2. Preparazioni di siero omologhe da sangue di donatore.

Le preparazioni sieriche omologhe sono ottenute dal sangue di donatori appositamente immunizzati contro uno specifico agente patogeno o le sue tossine. Quando tali farmaci vengono introdotti nel corpo umano, gli anticorpi circolano nel corpo leggermente più a lungo, fornendo immunità passiva o effetto curativo entro 4-5 settimane. Attualmente vengono utilizzate immunoglobuline normali e specifiche e plasma di donatori. L'isolamento delle frazioni immunologicamente attive dai sieri dei donatori viene effettuato utilizzando il metodo della precipitazione con alcol.

Le immunoglobuline omologhe sono praticamente areattogene, pertanto raramente si verificano reazioni di tipo anafilattico con la somministrazione ripetuta di farmaci sierici omologhi.

2.3. Preparati per la terapia batterica (eubiotica).

I preparativi per la terapia batterica contengono ceppi batterici vivi e antagonisticamente attivi, rappresentanti della normale microflora. Esempi di tali farmaci sono lactobacterin, bifidumbacterin, colibacterin, bificol, bactisubtil, ecc. I microrganismi contenuti in tali farmaci hanno proprietà antagoniste nei confronti di vari microrganismi, principalmente microbi intestinali patogeni. Tali preparati si ottengono facendo crescere i microrganismi corrispondenti o le loro spore in mezzi nutritivi liquidi, seguiti dall'essiccazione sotto vuoto da uno stato congelato. I farmaci sono usati per trattare la disbiosi.

2.4. Preparazioni di batteriofagi terapeutici.

I batteriofagi sono virus di batteri. Penetrano nella cellula batterica, si moltiplicano e la lisano. Questa è la base per il loro utilizzo nel trattamento e nella prevenzione delle malattie infettive. L'azione dei batteriofagi è strettamente specifica e si manifesta in relazione a determinate specie e tipologie di agenti patogeni.

Per ottenere preparati di batteriofagi si utilizzano ceppi fagici industriali e corrispondenti colture batteriche. Coltivato in reattori con liquido mezzo nutritivo la coltura batterica viene infettata con una sospensione uterina del fago. Durante la riproduzione, i fagi fanno la lisi dei batteri e vengono rilasciati nel mezzo nutritivo, questa composizione è chiamata fagolizzato; Il mezzo nutritivo viene fatto passare attraverso filtri batterici per rimuovere i resti di cellule batteriche (filtrato fagolizzato). Il filtrato con batteriofagi viene preservato e monitorato per sterilità, innocuità e attività. Il prodotto finito è un liquido limpido colore giallo, confezionato in bottiglie. Insieme ai liquidi, vengono prodotti fagi in compresse secche con un rivestimento resistente agli acidi e supposte con fagi.

I fagi sono utilizzati per scopi terapeutici e profilattici. Nel nostro paese vengono prodotti preparati per salmonellosi, dissenteria, coliproteo, stafilococco, piofago, ecc. A seconda della malattia, i fagi vengono utilizzati localmente sotto forma di irrigazione, risciacquo, lozioni, tamponamento, per l'introduzione nella cavità delle ferite, cavità addominali, pleuriche, ecc., per via orale, nonché sottocutanea, intradermica e intramuscolare .

2.5 Preparazioni di citochine.

Le citochine sono sostanze prodotte da varie cellule del corpo e hanno un effetto immunostimolante aspecifico. Le citochine sono molto numerose e diverse, differiscono nei loro meccanismi d'azione, mentre normalizzano fattori umorali e cellulari di resistenza e influenza aspecifici fasi diverse e collegamenti di immunità. Le citochine possono essere utilizzate come adiuvanti nei vaccini e possono essere utilizzate come farmaci autonomi.

Patogenesi.

UN. Formazione di complessi immunitari.Gli immunocomplessi costituiti da un farmaco e un anticorpo si legano in modo aspecifico alle membrane degli eritrociti, seguito dall'attivazione del complemento. Un test di Coombs diretto con anticorpi del complemento è solitamente positivo, mentre con anticorpi IgG è negativo. Gli anticorpi contro il farmaco possono essere rilevati incubando il siero del paziente con globuli rossi normali in presenza del complemento e del farmaco. La maggior parte dei casi di anemia emolitica immunitaria indotta da farmaci sono causati da questo meccanismo. La somministrazione ripetuta del farmaco, anche in una piccola dose, provoca emolisi intravascolare acuta, manifestata da emoglobinemia, emoglobinuria e insufficienza renale acuta.

B. Formazione di anticorpi citotossici.Quando si lega ai globuli rossi, il farmaco diventa immunogenico e stimola la formazione di anticorpi, solitamente IgG. Solo il test diretto di Coombs con anticorpi anti-immunoglobuline è positivo. Gli anticorpi contro il farmaco vengono determinati come segue. Dopo che i globuli rossi normali sono stati incubati con questo farmaco, vengono miscelati con il siero del paziente. In presenza di anticorpi contro il farmaco, si sviluppa l'emolisi. Un classico esempio di anemia emolitica immunitaria causata da anticorpi citotossici è l'anemia causata dalla benzilpenicillina. Si verifica raramente e solo quando il farmaco viene prescritto dosi elevate(più di 10 milioni di unità/die e.v.): il test diretto di Coombs con anticorpi anti-immunoglobuline è positivo in circa il 3% dei pazienti, l'emolisi si sviluppa ancora meno frequentemente. La benzilpenicillina provoca emolisi extravascolare. La comparsa di IgG verso la benzilpenicillina non è associata ad un'allergia alle penicilline causata da IgE.

V. Alcuni farmaci, come le cefalosporine, causano l'aggregazione di IgG aspecifiche e del complemento, sebbene ciò sia raramente accompagnato da anemia emolitica. Un test di Coombs diretto può essere positivo; un test di Coombs indiretto è sempre negativo.

G. Formazione di autoanticorpi.I medicinali possono stimolare la formazione di autoanticorpi contro gli antigeni del sistema Rh. Ciò si verifica probabilmente a causa dell'inibizione dell'attività dei soppressori T e della proliferazione di cloni di linfociti B che producono i corrispondenti anticorpi. Il test diretto di Coombs con anticorpi anti-immunoglobuline è positivo. L'incubazione del siero del paziente con globuli rossi normali in assenza del farmaco determina l'assorbimento delle IgG sui globuli rossi. La sintesi degli autoanticorpi contro i globuli rossi è causata da metildopa, levodopa e acido mefenamico. Il test diretto di Coombs è positivo in circa il 15% dei pazienti che assumono metildopa, ma l'anemia emolitica si sviluppa in meno dell'1% dei pazienti. L'effetto della metildopa sulla formazione di autoanticorpi contro i globuli rossi sembra essere dose-dipendente. L'anemia si sviluppa gradualmente, nel corso di diversi mesi di utilizzo del farmaco, ed è causata dall'emolisi extravascolare.

2. Trattamento.Innanzitutto e soprattutto tappa importante Trattamento dell'anemia emolitica immunitaria indotta da farmaci: sospensione del farmaco che l'ha causata. Per l'emolisi causata complessi immunitari, dopo di che avviene rapidamente il recupero. Nei casi più gravi si osserva insufficienza renale acuta. Nell'emolisi causata da autoanticorpi, il recupero è più lento (di solito diverse settimane). Il test di Coombs può rimanere positivo per 1-2 anni.

Oggi sono diventati un reagente necessario nei laboratori biologici. Le vendite di farmaci contenenti anticorpi monoclonali, finalizzati alla cura di malattie gravi (psoriasi, cancro, artrite, sclerosi), hanno un fatturato multimiliardario. Sebbene nel 1975, quando fu pubblicato un articolo sul metodo per produrre gli ibridomi, solo pochi credevano nella loro uso pratico.

Cosa sono gli anticorpi monoclonali

Sono prodotti cellule immunitarie, discendente dallo stesso predecessore, appartenente allo stesso clone. Questo fenomeno si osserva durante la crescita dei linfociti B in coltura. Tali anticorpi possono essere prodotti contro quasi tutti gli antigeni naturali (ad esempio, combat proteina estranea e polisaccaridi), che legheranno in modo specifico. Vengono quindi utilizzati per rilevare questa sostanza o purificarla. I monocloni sono ampiamente utilizzati in biochimica, biologia molecolare e medicina. Gli anticorpi non sono facili da produrre, il che influisce direttamente sul loro costo.

Preparazione di anticorpi monoclonali

Questo processo inizia con l'immunizzazione degli animali, solitamente i topi. Per fare ciò, viene introdotto un antigene specifico, che sintetizza gli anticorpi contro di esso. La milza viene quindi rimossa dal topo e omogeneizzata per ottenere una sospensione cellulare. Contiene cellule B che producono l'anticorpo. Vengono poi mescolati con il mieloma (plasmcitoma murino), che ha una capacità continua di sintetizzare i propri tipi in coltura (cloni tumorali).

Grazie alla fusione si formano ibridi di cellule tumorali e normali (ibridomi), in continua crescita e capaci di produrre una miscela di anticorpi di una determinata specificità. Il passo successivo dopo aver ottenuto un ibrido è la clonazione e la selezione. Circa 10 cellule fuse vengono poste in ciascun pozzetto di una piastra speciale e coltivate, testandole per la produzione di immunoglobuline specifiche. Gli ibridomi provenienti da pozzetti contenenti gli anticorpi identici desiderati (paraproteine) vengono clonati e nuovamente testati. Questo viene fatto 1-2 volte.

Come risultato, si ottengono cellule che sono in grado di produrre le proprie immunoglobuline di una sola specificità unica desiderata. I cloni possono quindi essere congelati e conservati. Oppure coltivare, accumulare, inoculare nei topi, dove cresceranno anche loro. Successivamente, le molecole di immunoglobulina risultanti metodi diversi vengono purificati dalle impurità estranee e utilizzati per la diagnostica in laboratorio o per uso terapeutico.

È importante notare che il clone cellulare ottenuto utilizzando un ibridoma è un'immunoglobulina murina che, se entra nel corpo umano, provoca una reazione di rigetto. Una soluzione è stata trovata grazie alle tecnologie ricombinanti. Prendendo un frammento di un monoclone di topo, lo abbiamo combinato con un frammento di immunoglobulina umana. Si ottennero così degli ibridomi, detti chimerici, che già erano più vicini all'uomo, ma provocavano comunque reazioni immunitarie nell'organismo diverse da quelle richieste.

Il passo successivo è stato compiuto grazie a Ingegneria genetica ed è associato alla creazione dei cosiddetti anticorpi umanizzati, omologhi al 90%. immunoglobulina umana. Del monoclone ibridoma murino originale rimane solo una piccola parte della fusione delle cellule responsabili del legame specifico. Sono usati dentro test clinici.

Applicazione

I monocloni sostituiscono con successo i sieri immunitari. Gli ibridomi hanno creato capacità sorprendenti nell’analisi: vengono utilizzati come un “microscopio” con una risoluzione insolitamente alta. Con il loro aiuto, puoi rilevare antigeni unici caratteristici di cellule cancerogene tessuti specifici, ottenere per essi monocloni con una certa specificità e utilizzarli per la diagnosi e la tipizzazione delle neoplasie. Sono utilizzati anche nel trattamento della psoriasi, sclerosi multipla, artrite, morbo di Crohn, cancro al seno e molti altri.

Per la psoriasi

Per il trattamento della psoriasi forme gravi prescrivere glucocorticosteroidi sistemici ( ormoni steroidei), influenzando sfondo ormonale umano e soppressivo immunità locale. Gli anticorpi monoclonali per la psoriasi agiscono esclusivamente sulle cellule attive dell'infiammazione psoriasica, senza sopprimere completamente il sistema immunitario. Effetto terapeutico– riduzione dell’attività infiammatoria, normalizzazione della divisione cellulare della pelle e scomparsa delle placche psoriasiche.

Per l'artrite reumatoide

Anticorpi monoclonali per artrite reumatoide si sono dimostrati efficaci in situazioni in cui altri mezzi non sono stati efficaci effetto terapeutico. IN paesi europei Oggi, la principale direzione terapeutica per questa malattia sono tali farmaci. Percorso terapeutico a lungo termine, perché i farmaci agiscono, sebbene in modo efficace, ma lentamente. A causa delle difficoltà nella diagnosi dell'artrite assistenza medica Vale la pena contattare il prima possibile, ai primi sintomi e sospetti.

Per il trattamento del cancro

Per elevato numero Per i pazienti oncologici, i prodotti farmaceutici contenenti monocloni sono diventati la speranza di guarigione e di ritorno alla normalità vita normale. Molte persone con grandi tumore maligno corpo, molte cellule tumorali e una prognosi deludente: dopo un ciclo di terapia, avvertì un miglioramento delle sue condizioni. Gli anticorpi monoclonali per il trattamento del cancro presentano evidenti vantaggi:

Attaccandosi alle cellule maligne, non solo le rendono più visibili, ma le indeboliscono e ne interrompono la struttura. Con loro al corpo umano molto più facile da combattere.
Avendo trovato il loro obiettivo, aiutano a bloccare i recettori della crescita tumorale.
Gli anticorpi vengono sviluppati in condizioni di laboratorio, dove vengono deliberatamente combinati con piccole quantità di particelle radioattive. Trasportando queste particelle in tutto il corpo, le consegnano direttamente al tumore, dove iniziano ad agire.

Principio del trattamento

L'azione dei monocloni è semplice: riconoscono determinati antigeni e si legano ad essi. In tal modo il sistema immunitario nota rapidamente il problema e lo combatte. Aiutano il corpo umano a far fronte da solo agli antigeni. Un altro enorme vantaggio è che agiscono esclusivamente sulle cellule patologicamente alterate, senza causare danni a quelle sane.

Farmaci con anticorpi monoclonali

Sebbene gli ibridi di cellule normali e tumorali di questo tipo siano stati inventati non molto tempo fa, la gamma di farmaci che li contengono sembra già impressionante. Nuovi prodotti farmaceutici compaiono regolarmente. Tali farmaci, come la maggior parte medicinali, hanno vari effetti collaterali. Spesso dopo l'uso di sostanze monoclonali si verificano lamentele sulla manifestazione reazioni allergiche sotto forma di prurito, eruzione cutanea. Raramente la terapia è accompagnata da nausea, vomito o disturbo intestinale. Di più farmaci efficaci più dettagli.

Stellara

Utilizzato nel trattamento delle forme gravi di psoriasi a placche. Il farmaco è costituito da monocloni umani, che riducono il rischio di effetti collaterali al minimo. Modulo di liberatoria – soluzione per somministrazione sottocutanea in una bottiglia o in una siringa. La dose raccomandata è di 45 mg al giorno. La seconda iniezione viene somministrata 4 settimane dopo la prima, quindi le iniezioni vengono somministrate una volta ogni 12 settimane. L'effetto terapeutico di Stelar apparirà entro 15-20 giorni. Il trattamento di mantenimento garantisce la durata della remissione. Dopo 2 iniezioni, la pelle viene schiarita del 75%.

Remicade

È un anticorpo chimerico basato su monocloni murini e umani. Il farmaco riduce l'infiammazione dell'epidermide e regola la divisione delle cellule della pelle. Forma di rilascio – polvere liofilizzata per la preparazione soluzione parenterale oppure in flaconi da 20 ml. La composizione per infusione viene somministrata per via endovenosa nell'arco di 2 ore ad una velocità fino a 2 ml al minuto. Il dosaggio dipende dalla gravità della malattia. Le iniezioni ripetute vengono somministrate 2 e 6 settimane dopo la prima. Per mantenere l'effetto, la terapia viene ripetuta ogni 1,5-2 mesi.

Humira

Monoclone ricombinante con una sequenza peptidica identica a quella umana. Il farmaco è efficace in terapia forme complesse psoriasi, artrite reumatoide attiva grave e artrite psoriasica. Utilizzato nel modulo iniezioni sottocutanee nella zona addominale o anteriore superficie femorale. Forma di rilascio: soluzione per somministrazione sottocutanea. Le iniezioni da 40 mg vengono somministrate una volta ogni 2 settimane.