PHA, czyli bierna reakcja hemaglutynacji, jaki to rodzaj badania krwi? Pełna interpretacja testów na kiłę Rpga 1 2560 co to oznacza

Jednym z najważniejszych badań krwi dla organizmu jest test RPHA. Można go wykorzystać do określenia obecności w organizmie patogenów, takich jak kiła. Analiza ta jest uznawana za jeden z najbardziej wiarygodnych sposobów ustalenia, czy organizm jest dotknięty kiłą. Poznajmy go bardziej szczegółowo.

Skrót RPHA odnosi się do specjalnej reakcji, która objawia się bierną hemaglutynacją w organizmie. Za pomocą tej reakcji można wykryć proces aglutynacji. Ponadto w trakcie tego procesu na powierzchniowych warstwach wielu z nich ujawnia się obecność antygenów Treponema pallidum. Ten organizm jest czynnikiem wywołującym kiłę.

Gdy Treponema pallidum dotrze do organizmu zdrowego człowieka, wywołuje rozwój odpowiedzi immunologicznej. Podczas tego procesu organizm wytwarza przeciwciała nieswoiste lub niekrętkowe oraz specyficzne lub krętkowe.

Obecność przeciwciał Treponema pallidum w pobranej próbce krwi jest dokładnym potwierdzeniem kiły w laboratorium.

Wszystkie badania serologiczne przeprowadzane w laboratorium dzielą się na dwie grupy:

  1. Specjalny rodzaj badania (krętkowy);
  2. Niespecyficzny rodzaj badania (niekrętkowy).

Podział badań na te grupy wynika z rodzaju przeciwciał wykrywanych w RPHA. Określenie biernej reakcji hemaglutynacji, czyli RPHA, jest specyficznym rodzajem badań w odniesieniu do czynnika sprawczego kiły.

Reakcja zachodzi w obecności przeciwciał przeciwkrętkowych. Reakcję tę po raz pierwszy zastosował jeden z naukowców w 1965 roku i od razu zyskała szerokie uznanie wśród współpracowników i pacjentów. Dziś za pomocą tej metody z powodzeniem diagnozuje się taką chorobę organizmu ludzkiego, jak kiła. Metodologia jego określania należy do kategorii testów specyficznych (krętkowych).

Dzięki tej bardzo czułej metodzie diagnostycznej można łatwo określić obecność dowolnego stadium kiły w organizmie:

  1. Podstawowy
  2. Utajony
  3. Wtórny
  4. Trzeciorzędowy

Więcej informacji na temat kiły można znaleźć w filmie.

Przy oddawaniu krwi dla RPGA dane z reakcji mikroprecypitacji potwierdzane są z dokładnością do najmniejszych frakcji. RPGA pozwala na identyfikację fałszywie dodatnich przypadków rozwoju choroby uzyskanych w trakcie zabiegu.

W niektórych przypadkach metoda RPGA może wywołać u pacjenta fałszywie dodatni wynik.

Dzieje się tak, jeśli u danej osoby rozwinęły się choroby autoimmunologiczne. Jeżeli organizm ludzki jest dotknięty pewną grupą chorób wirusowych, w trakcie rozwoju których u pacjenta wzrasta liczba nieswoistych przeciwciał, dane RPGA również mogą być fałszywe. Powodem tego jest wykorzystanie w tej metodzie uczulonych czerwonych krwinek.

Kiedy trzeba oddać krew dla RPGA?

Pacjentowi przepisuje się analizę RPGA, jeśli istnieje podejrzenie rozwoju jakichkolwiek stadiów kiły w jego organizmie. Ponadto analiza ta jest konieczna w przypadku niektórych kategorii kobiet. To właśnie na wczesnym etapie wykrycie tej choroby pozwoli Ci przepisać odpowiednie leczenie i zaplanować ciążę, mając na celu urodzenie zdrowego dziecka.

Oddawanie krwi w celu określenia kiły w organizmie jest również zalecane podczas przygotowywania pacjenta do zaplanowanej operacji. W tym przypadku możliwy jest pomyślny wynik interwencji chirurgicznej w organizmie. Również potwierdzenie obecności patogenów kiły w organizmie pozwoli lekarzom zaplanować przebieg zbliżającej się operacji w taki sposób, aby oczekiwany efekt terapeutyczny był maksymalny.

Oznaczanie czynników kiły we krwi metodą RPGA jest również ważne w przypadku badania dawców przed oddaniem krwi.

Dzięki RPHA w tym przypadku można zapobiec setkom przypadków zarażenia biorców krwią chorych na kiłę. Jednocześnie zdarza się, że ludzie zgłaszają się do ośrodków krwiodawstwa jako dawcy, a po oddaniu krwi do RPGA dowiadują się, że mają kiłę.


Ustalenie czynników wywołujących kiłę w jego organizmie zajmuje trochę czasu, a wyniki stają się znane. Zwykle RPGA daje pozytywny wskaźnik po czterech tygodniach od początkowej infekcji.

W wielu przypadkach pierwotny etap choroby charakteryzuje się obniżonymi wskaźnikami; jego dane są następujące: mniej niż 1:320. Wtórnemu etapowi kiły towarzyszy wzrost odczytów miareczkowania: nieco ponad 1:320. Kiła utajona ponownie daje niskie miano.

Po zakończeniu przepisanego leczenia ustalonego stadium kiły badanie krwi na obecność RPHA u tego pacjenta nadal daje wynik pozytywny.

I nie jest to przypadek odosobniony, ale powszechny i ​​potwierdza się przez całe życie w tej kategorii osób.

Sama procedura przygotowania i analizy

Przed oddaniem krwi sprawdź, czy nie ma patogenów, takich jak kiła.

Przecież to właśnie zniekształcenie danych z tak ważnej analizy może spowodować przepisanie pacjentowi niewłaściwego leczenia, a to, jak wiemy, może spowodować rozwój innych patologii w organizmie.

Przygotowanie do tej analizy jest dość proste:

  1. Na początek powinieneś odmówić przyjmowania jakichkolwiek pokarmów przed oddaniem krwi na rzecz RPGA. Innymi słowy, na analizę należy przyjść na pusty żołądek.
  2. Niewskazane jest także spożywanie znacznych ilości płynów przed oddaniem krwi na rzecz RPGA. Składniki napojów spożywanych przez pacjenta również mogą mieć wpływ na wyniki tej analizy.
  3. Najlepiej wykonać ten test w pierwszej połowie dnia, ponieważ będzie Ci trudno obejść się bez jedzenia i wody przez cały dzień.
  4. Przed badaniem na obecność RPHA pacjentowi zaleca się powstrzymanie się od palenia przez trzydzieści minut. Substancje zawarte w dymie tytoniowym mogą zaburzać wiarygodność wyników tej analizy.

    Procedura pobrania próbki krwi jest dość prosta i prawie bezbolesna. Po zabiegu specjalista laboratorium na pewno ustali godzinę, w której będzie można przyjść po gotowe wyniki.

W przypadku kiły pierwotnej należy zbadać wydzielinę wrzodową lub punktowe węzły chłonne w kierunku krętka bladego. W przypadku kiły wtórnej materiał pobiera się z powierzchni zerodowanych grudek na skórze, błon śluzowych, pęknięć itp. Przed pobraniem materiału w celu oczyszczenia z różnych zanieczyszczeń powierzchnię zmian chorobowych (nadżerki, owrzodzenia, pęknięcia ) należy dokładnie przetrzeć sterylnym wacikiem zwilżonym izotonicznym roztworem chlorku sodu lub przepisać płyny z tym samym roztworem. Oczyszczoną powierzchnię osusza się suchym wacikiem i za pomocą platynowej pętelki lub szpatułki lekko podrażnia miejsca peryferyjne, jednocześnie lekko ściskając podstawę elementu palcami w gumowej rękawiczce, aż do pojawienia się płynu tkankowego (surowicy), z którego przygotowywane jest przygotowanie do badań. Pobranie płynu tkankowego jest ważne w diagnostyce kiły, ponieważ treponema pallidums znajdują się w światłach naczyń włosowatych limfatycznych, w szczelinach tkankowych wokół naczyń limfatycznych i krwionośnych.

Nakłucie regionalnych węzłów chłonnych

Skórę nad węzłami chłonnymi traktuje się 96% alkoholem i 3-5% alkoholowym roztworem jodu. Następnie użyj pierwszego i drugiego palca lewej ręki, aby unieruchomić węzeł chłonny. Prawą ręką weź jałową strzykawkę z kilkoma kroplami izotonicznego roztworu chlorku sodu, którą wstrzykuje się równolegle do osi podłużnej węzła chłonnego. Igłę w różnych kierunkach dociska się do przeciwległej ścianki torebki węzła i powoli wstrzykuje zawartość strzykawki. Palcami lewej ręki delikatnie masujemy węzeł chłonny. Podczas powolnego wycofywania igły jednocześnie wyciąga się tłok strzykawki, zasysając zawartość węzła chłonnego. Materiał nanosi się na szkiełko (w przypadku małej ilości materiału dodaje się kroplę izotonicznego roztworu chlorku sodu) i przykrywa szkiełkiem nakrywkowym. Badanie leku natywnego prowadzi się w ciemnym polu widzenia przy użyciu mikroskopu światło-optycznego z kondensorem ciemnego pola (obiektyw 40, 7x, 10x lub 15x). Treponema pallidum można znaleźć także w preparatach kolorowych. Po wybarwieniu według Romanovsky-Giemsa jasne treponemy zabarwiają się na różowo, według Fontana i Morozowa - na brązowo (czarnie), według metody Burriego, niezabarwione treponemy ujawniają się na ciemnym tle.

Diagnostyka serologiczna

W diagnostyce kiły, ocenie skuteczności leczenia, ustaleniu kryterium wyleczenia i identyfikacji postaci utajonych, opornych, duże znaczenie mają standardowe (klasyczne) i specyficzne reakcje serologiczne. Standardowe lub klasyczne reakcje serologiczne (SSR) obejmują:
  • reakcja Wassermana (WR),
  • reakcje osadowe Kahna i Sachsa-Vitebsky'ego (cytocholowe),
  • reakcja na szkle (metoda ekspresowa),
do konkretnego:
  • reakcja unieruchomienia treponema pallidum (reakcja treponema pallidum),
  • reakcja immunofluorescencyjna (RIF).

Reakcja Wassermana (WR)

- opracowany przez A. Wassermana wspólnie z A. Neisserem i C. Bruckiem w 1906 roku. Reakcja Wassermana opiera się na zjawisku wiązania dopełniacza (reakcja Bordeta-Gengou) i pozwala na oznaczenie przeciwciał (odczynników) antylipidowych. Według współczesnych koncepcji reakcja Wassermana wykrywa przeciwciała przeciwko lipidom makroorganizmu, a nie Treponema pallidum, a reakcja ujawnia proces autoimmunologiczny, który jest spowodowany denaturacją tkanek makroorganizmu przez Treponema pallidum z utworzeniem kompleksu lipoproteinowego ( koniugat), w którym wyznacznikiem są lipidy (hapten).

RV zwykle diagnozuje się na podstawie dwóch lub trzech antygenów. Najczęściej stosowane są bardzo czuły antygen kardiolipinowy (ekstrakt z serca bydlęcego wzbogacony cholesterolem i lecytyną) i antygen krętkowy (sonikowana zawiesina hodowanych anatogennie krętków pallidum). Antygeny te wraz z odczynami surowicy pacjenta tworzą kompleks immunologiczny zdolny do adsorbowania i wiązania dopełniacza. Aby wizualnie określić powstały kompleks (reagina + antygen + dopełniacz), jako wskaźnik stosuje się układ hemolityczny (mieszanina erytrocytów owczych z surowicą hemolityczną). Jeżeli w 1. fazie reakcji dopełniacz zostanie związany (reaginy + antygen + dopełniacz), nie zachodzi hemoliza - czerwone krwinki wytrącają się w łatwo zauważalny osad (PB dodatni). Jeżeli w fazie 1 dopełniacz nie zostanie związany ze względu na brak odczynników w surowicy testowej, zostanie wykorzystany przez układ hemolityczny i nastąpi hemoliza (RT ujemny). Stopień nasilenia hemolizy podczas określania stopnia zaawansowania RV ocenia się na podstawie plusów: całkowity brak hemolizy ++++ lub 4+ (RV jest wyraźnie dodatni); ledwo rozpoczęta hemoliza +++ lub 3+ (RV dodatni); znacząca hemoliza ++ lub 2+ (RV słabo dodatni); niejasny obraz hemolizy ± (RV jest wątpliwe); całkowita hemoliza - (reakcja Wassermanna ujemna).

Oprócz jakościowej oceny PB, przeprowadza się ocenę ilościową przy różnych rozcieńczeniach surowicy (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Miano odczynnika określa się na podstawie maksymalnego rozcieńczenia, które nadal daje wyraźnie dodatni wynik (4+). Ilościowa ocena stopnia zaawansowania RV jest istotna w diagnostyce niektórych postaci klinicznych zakażenia kiłą, a także w monitorowaniu skuteczności leczenia. Obecnie reakcję Wassermana przeprowadza się z dwoma antygenami (kardiolipiną i szczepem Reitera o głosie krętkowym). Z reguły RV staje się dodatni po 5-6 tygodniach od zakażenia u 25-60% pacjentów, po 7-8 tygodniach - u 75-96%, po 9-19 tygodniach - u 100%, chociaż w ostatnich latach czasami wcześniej lub później . Jednocześnie miano odczynnika stopniowo wzrasta i osiąga wartość maksymalną (1:160-1:320 i więcej) w przypadku uogólnionych wysypek (kiła wtórna świeża). Kiedy wynik RV jest dodatni, stawia się diagnozę kiły pierwotnej seropozytywnej.
Z wtórnym świeżym i kiły nawracającej wtórnej, RV jest dodatnie u 100% pacjentów, ale u pacjentów z wyczerpaniem i osłabioną odpornością można zaobserwować wynik negatywny. Następnie miano odczynnika stopniowo maleje iw przypadku kiły wtórnej nawrotowej zwykle nie przekracza 1:80-1:120.
Na kiłę trzeciorzędową RV jest dodatnie u 65-70% pacjentów i zwykle obserwuje się niskie miano odczynnika (1:20-1:40). W późnych postaciach kiły (kiła narządów wewnętrznych, układu nerwowego) dodatni RV obserwuje się w 50-80% przypadków. Miano odczynnika mieści się w zakresie od 1:5 do 1:320.
Na utajoną kiłę dodatni RV obserwuje się u 100% pacjentów. Miano odczynnika wynosi od 1:80 do 1:640, a w przypadku kiły utajonej późnej od 1:10 do 1:20. Gwałtowny spadek miana odczynnika (aż do całkowitego wyniku ujemnego) podczas leczenia wskazuje na skuteczność leczenia.

Wady reakcji Wassermana- niewystarczająca czułość (ujemna w początkowej fazie kiły pierwotnej). Wynik negatywny uzyskuje się także u 1/3 chorych, którzy byli w przeszłości leczeni antybiotykami, u chorych na kiłę trzeciorzędową czynną ze zmianami na skórze i błonach śluzowych, narządach kostno-stawowych, narządach wewnętrznych, ośrodkowym układzie nerwowym oraz z późnymi wrodzonymi syfilis.
Brak konkretów- reakcja Wassermana może być pozytywna u osób, które wcześniej nie chorowały i nie mają kiły. W szczególności fałszywie dodatnie (niespecyficzne) wyniki RV obserwuje się u pacjentów chorych na toczeń rumieniowaty układowy, trąd, malarię, nowotwory złośliwe, uszkodzenie wątroby, rozległy zawał mięśnia sercowego i inne choroby, a czasami u osób całkowicie zdrowych.
Wykryto krótkotrwałą fałszywie dodatnią reakcję Wassermana u niektórych kobiet przed lub po porodzie, u narkomanów, po znieczuleniu lub spożyciu alkoholu. Z reguły fałszywie dodatni RV ulega słabej ekspresji, często z niskim mianem odczynu (1:5-1:20), dodatnim (3+) lub słabo dodatnim (2+). Podczas masowych badań serologicznych częstość wyników fałszywie dodatnich wynosi 0,1–0,15%. Aby przezwyciężyć niewystarczającą czułość, stosuje się próbę zimna (reakcję Kolyara) i jednocześnie przeprowadza się ją z innymi reakcjami serologicznymi.

Reakcje osadowe Kahna i Sachsa-Witebskiego

Reakcję Wassermana stosuje się w połączeniu z dwoma reakcje osadowe (Kahna i Sachsa-Vitebsky’ego), po etapie, przygotowywane są bardziej stężone antygeny. Metoda ekspresowa (mikroreakcja na szkle) - dotyczy reakcji lipidowych i opiera się na reakcji strącania. Umieszcza się ją ze specyficznym antygenem kardiolipiny, którego 1 kroplę miesza się z 2-3 kroplami badanej surowicy krwi w dołkach specjalnej szklanej płytki.
Korzyść- szybkość otrzymania odpowiedzi (w ciągu 30-40 minut). Wyniki ocenia się na podstawie ilości osadzonego osadu i wielkości płatków. Ekspresyjność definiowana jest jako CSR – 4+, 3+, 2+ i negatyw. Należy zauważyć, że wyniki fałszywie dodatnie obserwuje się częściej niż w przypadku RV. Z reguły metodę ekspresową stosuje się do masowych badań na kiłę, do badań w klinicznych laboratoriach diagnostycznych, oddziałach somatycznych i szpitalach. Na podstawie wyników metody ekspresowej zabrania się rozpoznawania kiły; wyklucza się jej stosowanie u kobiet w ciąży, dawców, a także w celu kontroli po leczeniu.

Reakcja unieruchomienia Treponema pallidum (TPI)

Reakcja unieruchomienia Treponema pallidum (TPI)- zaproponowany w 1949 r. przez R.W.Nelsona i M.Mayera. Jest to najbardziej swoisty test diagnostyczny na kiłę. Jednak złożoność i wysoki koszt produkcji ograniczają jego zastosowanie. W surowicy krwi pacjentów oznacza się przeciwciała specyficzne dla wideo (immobilizyny), które prowadzą do unieruchomienia Treponema pallidum w obecności dopełniacza. Antygenem jest żywy patogenny Treponema pallidum wyizolowany od królików zakażonych kiłą. Za pomocą mikroskopu zlicza się utraconą ruchliwość (unieruchomienie) Treponema pallidum i ocenia wyniki RIBT: unieruchomienie Treponema pallidum od 51 do 100% jest dodatnie; od 31 do 50% - słabo pozytywny; od 21 do 30% - wątpliwe; od 0 do 20% - ujemne.
RIBT jest ważny w diagnostyce różnicowej w celu odróżnienia fałszywie dodatnich reakcji serologicznych od reakcji wywołanych kiłą. Późno staje się dodatnie niż RV, RIF i dlatego nie służy do diagnozowania zakaźnych postaci kiły, chociaż w wtórnym okresie kiły wynik pozytywny u 85-100% pacjentów.
W trzeciorzędowym okresie kiły z uszkodzeniem narządów wewnętrznych, układu mięśniowo-szkieletowego i układu nerwowego wynik testu RIBT jest dodatni w 98-100% przypadków ( RV jest często ujemny).
Należy pamiętać, że RIBT może dać wynik fałszywie dodatni, jeśli w surowicy testowej znajdują się leki treponemobójcze (penicylina, tetracyklina, makrolity itp.), które powodują nieswoiste unieruchomienie Treponema pallidum. W tym celu bada się krew w kierunku RIBT nie wcześniej niż 2 tygodnie po zakończeniu przyjmowania antybiotyków i innych leków.
RIBT, podobnie jak RIF, ulega powolnej ujemnej wartości podczas leczenia, dlatego nie jest stosowany jako kontrola podczas leczenia.

Reakcja immunofluorescencyjna (RIF)

Reakcja immunofluorescencyjna (RIF)- opracowany w 1954 r. przez A.Coonsa i po raz pierwszy zastosowany do diagnostyki infekcji syfilitycznej przez Deacona, Falcone, Harrisa w 1957 r. RIF opiera się na pośredniej metodzie oznaczania przeciwciał fluorescencyjnych. Antygenem do produkcji jest patogenny dla tkanek Treponema pallidum utrwalony na szkiełkach, na które nanosi się surowicę testową. Jeżeli w surowicy testowej znajdują się przeciwciała przeciwkrętkowe spokrewnione z klasami IgM i IgG, to silnie wiążą się one z antygenem – krętkiem, który wykrywa się w mikroskopie fluorescencyjnym przy użyciu antygatunkowej („antyludzkiej”) surowicy fluorescencyjnej.
Wyniki RIF uwzględnia się intensywność świecenia bladego krętka w preparacie (żółto-zielona poświata). W przypadku braku przeciwciał przeciwkrętkowych w surowicy, krętek blady nie jest wykrywany. W obecności przeciwciał wykrywa się blask bladego krętka, którego stopień wyraża się w plusach: 0 i 1+ - reakcja ujemna; od 2+ do 4+ - pozytywny.
RIF odnosi się do grupowych reakcji krętkowych i jest podawany w 10- i 200-krotnym rozcieńczeniu surowicy testowej (RIF-10 i RIF-200). RIF-10 jest uważany za bardziej czuły, ale często uzyskuje się niespecyficzne wyniki pozytywne niż w przypadku RIF-200 (ma wyższą swoistość). Zazwyczaj, RIF staje się dodatni wcześniej niż RV- dodatni w pierwotnej kile seronegatywnej u 80% chorych, u 100% w wtórnym okresie kiły, zawsze dodatni w kile utajonej iw 95-100% przypadków w postaciach późnych i kiły wrodzonej.
Specyfika RIF wzrasta po wstępnym potraktowaniu surowicy testowej sorbentem-ultradźwiękowym antygenem krętkowym, który wiąże przeciwciała grupowe (RIF – abs).
Wskazania do RIBT i RIF- diagnostyka kiły utajonej w celu potwierdzenia specyfiki zespołu reakcji lipidowych w przypadku podejrzenia zakażenia syfilitycznego na podstawie dodatniego wyniku RV. Dodatni wynik RIBT i RIF świadczy o kile utajonej. W przypadku fałszywie dodatniego wyniku RV w różnych chorobach (toczeń rumieniowaty układowy, nowotwory złośliwe itp.) i jeśli powtarzane wyniki RIBT i RIF są ujemne, wskazuje to na niespecyficzny charakter RV. Podejrzenie późnych zmian syfilitycznych narządów wewnętrznych, układu mięśniowo-szkieletowego, układu nerwowego, jeśli pacjent ma ujemną RV. Podejrzenie pierwotnej kiły seronegatywnej, gdy u pacjentów z powtarzanymi badaniami wydzieliny z powierzchni erozji (wrzodu), nakłucia z powiększonych regionalnych węzłów chłonnych, nie wykryto treponema pallidum - w tym przypadku podaje się tylko RIF - 10.
Podczas badania osób z ujemnym RV którzy mieli długotrwałe kontakty seksualne i domowe z pacjentami chorymi na kiłę, biorąc pod uwagę prawdopodobną możliwość leczenia ich w niedawnej przeszłości lekami antysyfilitycznymi powodującymi negatywny wynik na RV. Test immunoenzymatyczny (ELISA – enzymlinked immunosorbent assay) – metoda opracowana przez E. Engvalla i wsp., S. Avramesa (1971). Istota polega na połączeniu antygenu syfilitycznego zaadsorbowanego na powierzchni nośnika fazy stałej z przeciwciałem z badanej surowicy krwi i identyfikacji specyficznego kompleksu antygen-przeciwciało za pomocą znakowanej enzymem antygatunkowej surowicy odpornościowej. Pozwala to na wizualną ocenę wyników testu ELISA poprzez stopień zmiany barwy substratu pod wpływem enzymu zawartego w koniugacie. Niewiarygodne wyniki testu ELISA mogą wystąpić w wyniku niedostatecznego rozcieńczenia składników, naruszenia warunków temperaturowych i czasowych, niezgodności pH roztworów, zanieczyszczenia szkła laboratoryjnego i nieprawidłowej techniki mycia mediów.

Pasywna reakcja hemaglutynacji (RPHA)

Zaproponowany jako test diagnostyczny na kiłę przez T.Rathleva (1965,1967), T.Tomizawę (1966). Makromodyfikacja reakcji nazywa się TRHA, mikromodyfikacja to MNA-TR, wersja zautomatyzowana to AMNA-TR, reakcja z makrokapsułkami polimocznikowymi zamiast czerwonych krwinek to MSA-TR. Czułość i swoistość RPGA są podobne do RIBT, RIF, ale RPGA ma mniejszą czułość we wczesnych postaciach kiły w porównaniu z RIF-abs i większą czułość w późniejszych postaciach kiły wrodzonej. RPGA dostarczane jest w wersji jakościowej i ilościowej.

Technika pobierania krwi do badań serologicznych

Do badania w kierunku RV, RIF, RIBT pobiera się krew z żyły łokciowej na czczo lub nie wcześniej niż 4 godziny po posiłku za pomocą sterylnej strzykawki lub jednej igły (grawitacyjnie). W miejscu pobrania skórę poddaje się wstępnej obróbce 70% alkoholem. Strzykawkę i igłę należy przemyć izotonicznym roztworem chlorku sodu. Do czystej, suchej i zimnej probówki wlewa się 5-7 ml krwi testowej. Na probówkę nakleja się czystą kartkę papieru z nazwiskiem, inicjałami, historią choroby lub numerem karty ambulatoryjnej pacjenta i datą pobrania krwi. Po pobraniu krwi probówkę umieszcza się w lodówce o temperaturze +4°+8°C do następnego dnia. Następnego dnia surowicę pobiera się do badania. Jeśli krew nie zostanie wykorzystana następnego dnia, surowicę należy odsączyć ze skrzepu i przechowywać w lodówce nie dłużej niż 1 tydzień. Do badania RIBT probówka musi być specjalnie przygotowana i sterylna. W przypadku naruszenia zasad pobierania krwi do badań, niezastosowanie się do warunków może skutkować zniekształceniem wyników.
Nie zaleca się pobierania krwi do badania po jedzeniu, spożyciu alkoholu, zażyciu różnych leków, po podaniu różnych szczepionek, a u kobiet w trakcie cyklu menstruacyjnego.
Do badań metodą ekspresową pobierano krew z czubka palca, podobnie jak podczas pobierania ESR, ale krew pobierano z o 1 kapilary więcej. Metodę ekspresową można również wykonać z surowicy krwi uzyskanej poprzez wkłucie żyły. W przypadku konieczności wykonania badania krwi w odległych laboratoriach zamiast krwi można przesłać suchą surowicę (metoda suchej kropli). W tym celu następnego dnia po pobraniu krwi oddziela się surowicę od skrzepu i pobiera do jałowej strzykawki w ilości 1 ml. Następnie serum wylewa się w postaci 2 oddzielnych krążków na pasek grubego papieru do pisania (papier woskowany lub celofan) o wymiarach 6x8 cm. Na wolnym brzegu zapisuje się nazwisko, inicjały osoby badanej i datę pobrania krwi papier. Papier z serum chronimy przed bezpośrednim nasłonecznieniem i pozostawiamy w temperaturze pokojowej do następnego dnia. Serum wysycha w postaci małych krążków błyszczącego, żółtawego, szklistego filmu. Następnie paski papieru z wysuszoną surowicą zwija się jak proszek farmaceutyczny i wysyła do laboratorium, wskazując diagnozę i cel, w jakim jest badane.

Oporność serologiczna

U niektórych (2% lub więcej) chorych na kiłę, pomimo całkowitego leczenia przeciwkiłowego, po zakończeniu leczenia następuje spowolnienie (brak) negatywnych reakcji serologicznych przez okres do 12 miesięcy lub dłużej. Występuje tak zwana oporność serologiczna, która jest często obserwowana w ostatnich latach. Istnieją formy oporności serologicznej:
  • PRAWDA(bezwzględne, bezwarunkowe) – konieczne jest przeprowadzenie dodatkowego leczenia przeciwsyfilitycznego, połączonego z terapią nieswoistą w celu zwiększenia sił odpornościowych organizmu.
  • Względny- po pełnym leczeniu treponema pallidum tworzą cysty lub formy L, które występują w organizmie w stanie mało zjadliwym i w efekcie dodatkowe leczenie nie zmienia wskaźników reakcji serologicznych, szczególnie RIF i RIBT.
Jednocześnie w postaciach cyst zachodzą drobne procesy metaboliczne, a otoczki form cyst są obcym białkiem (antygenem). Aby się chronić, organizm wytwarza specyficzne przeciwciała, które są dodatnie lub silnie dodatnie, gdy zachodzą reakcje serologiczne i nie ma objawów choroby. W przypadku form L procesy metaboliczne są bardziej ograniczone, a właściwości antygenowe są nieobecne lub nieznacznie wyrażone. Specyficzne przeciwciała nie są wytwarzane lub występują w małych ilościach, reakcje serologiczne są słabo pozytywne lub negatywne. Im dłuższy czas od zakażenia, tym większa liczba Treponema pallidums przekształca się w formy przeżywalne (cysty, zarodniki, formy L, ziarna), w przypadku których terapia antysyfilityczna jest nieskuteczna.

Pseudoopór- po leczeniu, pomimo pozytywnych reakcji serologicznych, Treponema pallidum nie występuje w organizmie. W organizmie nie ma antygenu, ale produkcja przeciwciał trwa, co wykrywa się podczas reakcji serologicznych.
Oporność serologiczna może rozwinąć się w wyniku:

  • nieodpowiednie leczenie bez uwzględnienia czasu trwania i stadium choroby;
  • niewystarczająca dawka, a w szczególności na skutek nieuwzględnienia masy ciała pacjenta;
  • naruszenie przerwy między podaniem leku;
  • utrzymywanie się treponema pallidum w organizmie pomimo całkowitego specyficznego leczenia, ze względu na ich oporność na penicylinę i inne leki chemioterapeutyczne w obecności ukrytych, otorbieniowych zmian w narządach wewnętrznych, układzie nerwowym, węzłach chłonnych, niedostępnych dla leków przeciwbakteryjnych (treponema pallidum często stwierdza się je w tkankach bliznowatych wiele lat po zakończeniu terapii, w węzłach chłonnych czasami można wykryć treponema pallidum 3-5 lat po leczeniu przeciwkiłowym);
  • redukcja sił ochronnych w różnych chorobach i zatruciach (endokrynopatie, alkoholizm, narkomania itp.);
  • ogólne wyczerpanie (spożywanie pokarmów ubogich w witaminy, białka, tłuszcze).
Ponadto często wykrywa się fałszywie dodatni wynik reakcji serologicznych, który nie jest związany z obecnością kiły u pacjentów, a jest spowodowany:
  • współistniejące niespecyficzne choroby narządów wewnętrznych, zaburzenia układu sercowo-naczyniowego, reumatyzm, dysfunkcja układu hormonalnego i nerwowego, ciężkie przewlekłe dermatozy, nowotwory złośliwe;
  • uszkodzenie układu nerwowego (ciężkie obrażenia, wstrząśnienie mózgu, uraz psychiczny);
  • ciąża; przewlekłe zatrucie alkoholem, nikotyną, narkotykami; choroby zakaźne (malaria, gruźlica, wirusowe zapalenie wątroby, czerwonka, tyfus, dur brzuszny i gorączka nawracająca).
Czynniki te mogą wpływać na reaktywność immunologiczną organizmu zarówno w okresie aktywnego rozwoju objawów syfilitycznych, jak i podczas ich regresji.

Obecnie do przeprowadzania RPGA używa się standardowych zestawów testowych.

Mają wszystko, czego potrzebujesz do analizy:

  • Butelka z czerwonymi krwinkami zawierającymi na powierzchni antygeny szczepu Treponema pallidum Nichols.
  • Ta sama pojemność, ale z „czystymi” czerwonymi krwinkami (potrzebnymi do kontroli).
  • Roztwór buforowy do rozcieńczania surowicy pacjenta (poniżej powiemy Ci, dlaczego to się robi).
  • Do kontroli wykorzystuje się także surowicę osoby chorej na kiłę (K+).
  • Surowica od znanej zdrowej osoby (K–).
  • Plastikowa płytka z ponumerowanymi dołkami do mieszania próbek i oceny wyników.

Każdy zestaw testowy zawiera zapas odczynników na określoną liczbę próbek. Zwykle - 100. Dlatego czasami surowicę przechowuje się do czasu pobrania wymaganej liczby próbek do badań.

Metodologia analizy RPGA

Pasywny test hemaglutynacji może dostarczyć dwóch rodzajów wyników:

  • Jakościowy. Daje odpowiedź na pytanie, czy badana próbka zawiera przeciwciała przeciwko patogenowi.
  • Ilościowy. Pozwala ocenić intensywność syntezy immunoglobulin, a tym samym śledzić aktywność infekcji.

Zazwyczaj najpierw przeprowadzana jest ocena jakościowa, a do badań ilościowych wybierane są próbki pozytywne.

Algorytm prostego wykrywania infekcji jest następujący:

  • Do studzienek płytki dodaje się równe dawki badanych próbek. Każdemu pacjentowi przydzielany jest rząd sześciu otworów.
  • W pierwszych dwóch kroplach jego osocze rozcieńczono buforem 1:20.
  • Kolejna para służy jako kontrola, umieszcza się w niej surowicę K+. I jeszcze dwa otwory na materiał K–.
  • Następnie do pierwszego dołka każdej pary dodaje się wyznakowane antygenem czerwone krwinki. Po drugie, czerwone krwinki są czyste.
  • Tabletkę wstrząsa się przez chwilę w celu dokładnego wymieszania odczynników i pozostawia w spokoju. Minimalny – 45 minut. Możesz to robić całą noc.

Wyniki ocenia się wizualnie. Jeśli reakcja jest ujemna, czerwone krwinki osiadają na dnie kulistego zagłębienia otworu.

Powinno to nastąpić w obu dołkach zawierających próbki pacjentów i tam, gdzie dodano czyste krwinki kontrolne systemu testowego.

Jeśli wynik jest pozytywny, czerwone krwinki nie gromadzą się w jednym miejscu, ale są równomiernie rozmieszczone na dnie dołka. Podobny obraz można zaobserwować, gdy standardowe krwinki czerwone znakowane antygenem miesza się z próbką pacjenta i surowicą K+. W ten sposób monitoruje się reakcję, co pozwala uniknąć fałszywych wyników.

Ilościowa ocena RPGA

Próbki pozytywne zbiera się i rozcieńcza kilkakrotnie roztworem buforowym (miareczkowanym). Przed każdym rozcieńczeniem surowicę wkrapla się do odpowiedniego dołka tabletki i nad nią zapisuje się stopień całkowitego rozcieńczenia. Następnie do próbek dodaje się czerwone krwinki z antygenem krętka i określa, przy jakim mianie nadal obserwuje się wynik dodatni. Jest to ilościowe badanie krwi w kierunku kiły RPHA, pokazuje stężenie przeciwciał przeciwko patogenowi.

Wyniki ocenia się w następujący sposób:

  • 4+ oznacza, że ​​czerwone krwinki pokrywają dno studzienki równą warstwą. Pojawienie się zagięć krawędzi wskazuje na wysokie stężenie przeciwciał w badanej próbce. Reakcja jest pozytywna.
  • Wynik 3+ jest przyznawany, jeśli okrąg jest czysty, ale część czerwonych krwinek „przepływa” do środka. Obraz przypomina rozciągnięty parasol i jest uważany za pozytywną reakcję.

  • 2+ wygląda jak szeroki pierścień z tendencją do rozjaśniania się w środku. Słabo pozytywne.
  • 1+ oznacza wynik wątpliwy. W otworze znajduje się wąski pierścień. Wymaga powtórzenia po 1-2 tygodniach.
  • W przypadku testu negatywnego czerwone krwinki tworzą guzik na środku studzienki.

Zdarzają się jednak serooporne przypadki kiły, w których wydaje się, że choroba ustąpiła, a przeciwciała utrzymują się przez długi czas. Dlatego RPGA czasami wymaga potwierdzenia innymi metodami.

Jeśli musisz zdać RPGA i przejść jakiekolwiek badanie na kiłę, skontaktuj się z kompetentnymi wenerologami.


Test hemaglucji Treponema pallidum (TPHA)

Co to jest bierna reakcja hemaglutynacji?

Reakcja hemaglutynacji biernej (test hemaglutynacji Treponema pallidum) opiera się na określeniu aglutynacji erytrocytów, ale na powierzchni których utrwalone są antygeny Treponema pallidum, co zachodzi tylko w obecności przeciwciał przeciw krętkowi. Rathleva w 1965 r. i jest szeroko stosowany w serodiagnostyce kiły i jest klasyfikowany jako test swoisty (krętkowy).

Kiedy przepisywany jest RPGA?

RPGA jest przepisywany w celu laboratoryjnego potwierdzenia wszystkich stadiów kiły. Zgodnie z rozporządzeniem Ministerstwa Zdrowia Rosji nr 87 z dnia 26 marca 2001 r. badanie krwi w teście RPGA w połączeniu z testem ORS zastępuje procedurę. KSR(zespół reakcji serologicznych na kiłę). RPGA nie jest stosowana jako pojedyncza reakcja w celu laboratoryjnego potwierdzenia diagnozy kiły, częściej jest stosowana w połączeniu z ORS (RPR) I RIF (FTA) .
RPHA może i jest stosowana w niektórych krajach do badań przesiewowych w kierunku kiły w formie zmodyfikowanego testu mikroaglutynacji (test mikrohemaglutynacji na przeciwciała przeciwko Treponema pallidum - MHA-TP).

Jak oceniane jest RPGA?

RPHA staje się dodatni 4 tygodnie po pierwotnym zakażeniu, w przypadku kiły pierwotnej stwierdza się niskie miano reakcji (poniżej 1:320), w przypadku kiły wtórnej miano reakcji wzrasta (ponad 1:320), w przypadku kiły utajonej miano reakcji ponownie spada do niskie. Po leczeniu kiły RPGA pozostaje dodatnie przez całe życie u prawie wszystkich pacjentów. W poniższej tabeli przedstawiono interpretację wyników RPGA w połączeniu z RMR i RIF w różnych stadiach kiły

RPR, VDRL

RIF (FTA)

RPHA (TPHA)

Interpretacja

brak kiły lub okresu inkubacji lub bardzo wczesne stadium

nieleczona lub niedawno leczona kiła

kiła pierwotna lub fałszywie dodatnie wyniki RPR i RIF

fałszywie dodatnie RPR i RPGA lub fałszywie ujemne RIF

leczona kiła lub nieleczona kiła późna

biologiczna reakcja fałszywie pozytywna

kiła pierwotna wczesna lub kiła niedawno leczona lub fałszywie dodatni wynik RIF

leczona kiła lub fałszywie dodatni wynik RPGA

Gdzie mogę uzyskać więcej informacji?

Ulubione

  • Hemaglutynacyjny test krętkowy na kiłę (J Clin Microbiol. 1983) Pełny tekst
  • Ocena testu krętkowego hemaglutynacji na kiłę J Clin Microbiol. Czerwiec 1984

Być może otrzymałeś skierowanie do laboratorium na analizę RPGA, ale tak naprawdę nie rozumiesz, co oznacza ten skrót. Co to jest i jak poważne jest, dowiesz się szczegółowo z tego artykułu.

Oprócz pacjentów z ciężkimi objawami chorób przenoszonych drogą płciową, na analizę RPGA mogą zostać skierowane osoby, które przechodzą badania lekarskie w celu znalezienia pracy, przed operacją lub gdy kobieta rejestruje się w ciąży. Nie ma tu nic strasznego ani wstydliwego, po prostu specjaliści badają populację pod kątem poważnych chorób seksualnych, co pozwala na szybkie zidentyfikowanie nosicieli infekcji i zapewnienie im właściwej opieki medycznej jeszcze zanim wystąpią powikłania.

Jeśli uprawiasz seks bez zabezpieczenia (nieważne, jak dobrze znasz swojego partnera seksualnego, bo wiele osób sama nie jest świadoma swojej infekcji) lub podejrzewasz swojego stałego partnera, możesz bezpiecznie oddać krew i szybko poznać wynik i rozwiać strach nieznany. Aby uzyskać skierowanie na badania laboratoryjne, nie jest konieczna wizyta u wenerologa. Wystarczy zwrócić się z tą prośbą do terapeuty lub poinformować o swoich niepokojących podejrzeniach ginekologa lub urologa.

Transkrypcja analizy

RPHA oznacza pasywną reakcję hemaglutynacji. Konieczne jest poznanie jego znaczenia przy określaniu obecności czynnika sprawczego ciężkiej choroby wenerycznej - kiły. Jeśli organizm ludzki uległ infekcji, można to dokładnie wykryć na podstawie wyników badania krwi.

W trakcie badania specjalista może wykryć aglutynację czerwonych krwinek, co oznacza, że ​​pod pewnym negatywnym wpływem czerwone krwinki zaczęły się sklejać i wytrącać. W tym przypadku jest to treponema pallidum, który żyje w górnych warstwach i wywołuje kiłę w organizmie.

Mechanizm infekcji jest dość prosty:

  1. Jest zdrowe ciało;
  2. Dostaje się do niego patogenny mikroorganizm Treponema pallidum;
  3. Rozwija się odpowiedź immunologiczna;
  4. To z kolei prowokuje produkcję przeciwciał, które są oznaką istniejącej choroby przenoszonej drogą płciową.

Badanie krwi na RPHA charakteryzuje się obecnością dwóch rodzajów przeciwciał, wskazujących na obecność lub brak czynnika wywołującego kiłę:

  • Niespecyficzne i niekrętkowe;
  • Specyficzny i krętkowy.

Tę technikę badawczą po raz pierwszy zastosowano w 1965 r. Od tego czasu jest aktywnie stosowany w diagnostyce kiły. Jego wysoka czułość pozwala nie tylko wykryć patogen, ale także określić stopień zaawansowania choroby.

Istnieją cztery znane formy kiły:

  1. Podstawowy;
  2. Wtórny;
  3. Trzeciorzędowy;
  4. Utajony.

Wraz z rozwojem patologii autoimmunologicznych, na tle niektórych chorób wirusowych, liczba nieswoistych przeciwciał w organizmie pacjenta może wzrosnąć, co w analizie RPGA zostanie odebrane jako fałszywa reakcja.

Badanie krwi RPGA wskazane jest u wszystkich pacjentów, u których wystąpiły dolegliwości podobne do objawów kiły lub gdy lekarz na podstawie dużego doświadczenia praktycznego podejrzewa coś podobnego.

Bardzo ważne jest również, aby część przedstawicielek, które planują wkrótce zajść w ciążę, poddała się podobnemu badaniu. Bo w ich przypadku muszą przejść leczenie, a potem myśleć już tylko o posiadaniu dziecka, jeśli oczywiście zależy im na zdrowiu.

Analiza ta często zaliczana jest do grupy badań obowiązkowych przed operacją. Dzięki pełnej diagnozie organizmu możliwe jest zaplanowanie przebiegu operacji i jej korzystnego wyniku.

Jak przystąpić do tego testu

Prawdopodobnie rozumiesz, jak poważną diagnozę można postawić na podstawie wyników analizy RPGA.

Czasami wniosek jest błędny ze względu na złe przygotowanie pacjenta do badania, dlatego fałszywie pozytywna odpowiedź staje się powodem przepisania bezużytecznego lub wręcz szkodliwego leczenia.

Aby zapobiec zniekształceniu wyników badań, wystarczy postępować zgodnie z poniższymi zaleceniami:

  • W przeddzień oddania krwi na rzecz RPGA nie należy spożywać żadnych posiłków. Analizę tę, podobnie jak większość innych, przeprowadza się wyłącznie na czczo;
  • W dniu wyznaczonym do analizy do organizmu nie powinny również przedostawać się napoje inne niż zwykła czysta woda. Jeśli pijesz dozwolony płyn, jego objętość powinna być minimalna, aby nie wpływała na skład krwi;
  • Zwykle, aby dana osoba nie głodowała i nie pragnęła, krew pobiera się rano;
  • Dziś rano lepiej w ogóle nie palić. Substancje zawarte w dymie i oparach mogą dać reakcję negatywną, przez co wyniki zostaną błędnie zinterpretowane przez asystenta laboratoryjnego;
  • Zakaz dotyczy także alkoholu. Ponadto lepiej na kilka dni przed badaniem zaprzestać picia alkoholu.

Po przybyciu do specjalnego pomieszczenia pacjent musi odsłonić ramię z ubrania, aby pielęgniarka mogła pobrać krew z żyły. Ta procedura jest znana prawie każdemu. Jest stosunkowo bezbolesny i szybki. Na koniec zostaniesz poinformowany, kiedy wyniki analizy RPGA będą gotowe i będzie można je zebrać.



Powiązane publikacje