Determinazione dell'antigene HLA-B27 mediante citometria a flusso. Antigene Hla b7 negativo cosa significa? A cosa serve il test?

La questione della correlazione degli antigeni HLA con la risposta immunitaria quando esposti ai microbi o ai loro antigeni è meno coperta. La risposta immunitaria dell'organismo all'introduzione di agenti virali e microbici è controllata geneticamente ed è in una certa misura correlata al fenotipo HLA. Si può presumere che anche il grado di attività del processo infettivo nel corpo sarà soggetto a questa regola.

Va notato che la relazione degli antigeni HLA con le malattie infettive non è stata ancora sufficientemente studiata. Esistono informazioni su un numero limitato di malattie, tra cui la lebbra, la tubercolosi, l'epatite sierica, ecc.

De Vries et al. ha studiato la lebbra utilizzando l'analisi familiare. In ogni famiglia sono stati tipizzati entrambi i genitori di due fratelli malati e di due fratelli sani. Inoltre, i fratelli sani erano più anziani di quelli malati. Gli studi condotti hanno permesso di identificare un numero significativamente maggiore di aplotipi nei pazienti che nei fratelli sani.

Un approccio originale allo studio della relazione tra antigeni HLA e insorgenza di malattie infettive è stato utilizzato da de Vries et al. . Gli autori hanno tipizzato la popolazione europea degli olandesi che si trasferì più di 200 anni fa in un altro continente in Suriname. Come è noto, dopo il reinsediamento, la maggior parte di loro si ammalò di tifo o di febbre gialla e morì. Nella popolazione olandese che attualmente abita quest'area, si è verificato un aumento significativo della frequenza degli antigeni HLA-B13, B17, Bw38, Bw50, nonché dell'antigene HLA-Aw30, che è strettamente legato agli antigeni HLA-B13 e Sono stati rilevati antigeni HLA-B17. Una bassa frequenza di insorgenza è caratteristica degli antigeni HLA-B7 e HLA-B12. Gli autori hanno confrontato questa popolazione con la popolazione principale dell'Olanda. La differenza tra la frequenza genetica osservata nella popolazione principale e quella in studio è stata calcolata utilizzando una formula speciale. Di conseguenza, è stato ipotizzato che gli individui il cui fenotipo conteneva gli antigeni HLA-B7 e HLA-B12 fossero più suscettibili al bacillo tifoide o al virus della febbre gialla. Al contrario, la resistenza a questi agenti patogeni era associata agli antigeni HLA-B13, B17 e Bw38.

Durante lo studio della relazione tra antigeni HLA e infezione da meningococco, sono stati esaminati 50 bambini che avevano avuto la meningite in momenti diversi durante lo studio. Parallelamente, 50 bambini sono stati tipizzati con meningococcemia e 28 con rinofaringite meningococcica. Studi sierologici hanno mostrato deviazioni nella distribuzione di alcuni antigeni HLA rispetto al gruppo di controllo. Caratteristica di tutte le varianti della malattia causata dal meningococco era un aumento della frequenza di insorgenza dell'antigene del locus B - HLA-Bw16. Nelle meningiti isolate, anche l'antigene HLA-B12 è stato ritrovato con maggiore frequenza: 34% rispetto al 13,3% nel gruppo di controllo (Tabella 1).

La frequenza di comparsa dell'antigene HLA-B8, soprattutto nella meningococcemia e nella rinofaringite, si è rivelata nettamente ridotta. Pertanto, l'antigene HLA-B8 non è stato rilevato nella nasofrenite e nella meningococcemia la sua frequenza era del 2% (nel controllo - 16,1%)

Pertanto, la predisposizione al meningococco è associata all'antigene HLA-Bw16. La malattia grave si è verificata più spesso nei soggetti con l'antigene HLA-B12. La natura della risposta dell'organismo è probabilmente associata a questo antigene, determinando un quadro clinico acuto della malattia. La resistenza al meningococco sembra essere associata all'antigene HLA-B8.

L'epatite virale B è una malattia infettiva causata da un virus specifico, l'HBs.

Il decorso clinico dell'epatite B è caratterizzato da una varietà di sintomi e gravità del processo. Le varianti cliniche di questa malattia dipendono in una certa misura dalla quantità di agenti patogeni che entrano nel corpo. In particolare, durante l'infezione enterale si osserva un portatore asintomatico del virus dell'epatite B, in cui di solito una dose relativamente piccola del virus entra nell'organismo. Tuttavia, la struttura genetica del microrganismo, in particolare la connessione dei geni responsabili della risposta immunitaria con il sistema HLA, sembra avere grande importanza nello sviluppo della malattia.

Durante la tipizzazione dei pazienti con epatite, è stato rivelato un aumento della frequenza di comparsa dell'antigene HLA-B18. Questa cifra nel gruppo generale dei pazienti non era così alta – 27,5%. Tuttavia, analizzando questo materiale tenendo conto del decorso clinico della malattia, è stato dimostrato che l'antigene HLA-B18 si trova più spesso nei pazienti con epatite cronica persistente (CPH) - 42,5%. Una frequenza relativamente alta è caratteristica dell'antigene HLA-B18 nei pazienti con epatite cronica attiva (CAH) - 30%.

Il polimorfismo dei geni del complesso HLA è insolitamente elevato e l'introduzione diffusa di metodi di biologia molecolare nell'immunogenetica porta ad un'ulteriore espansione dell'elenco delle varianti alleliche dei geni in studio. Questo processo, da un lato, rende difficile selezionare adeguatamente coppie donatore-ricevente pienamente compatibili per il trapianto, ma dall'altro consente di eseguire questa procedura con la massima efficienza. Il chiarimento del vero polimorfismo allelico dei geni del complesso maggiore di istocompatibilità può anche contribuire a stabilire la loro associazione più pronunciata con le malattie, perché Diventa chiaro che i collegamenti associativi di predisposizione a varie malattie con ampie specificità rilevate sierologicamente, stabiliti nella prima fase dello sviluppo dell'immunogenetica clinica, erano di natura preliminare e sono soggetti a chiarimenti dettagliati nell'attuale fase di sviluppo scientifico.

Ad oggi, il numero di alleli identificati dei geni del complesso HLA si avvicina al migliaio e continua a crescere.

Va notato che i meccanismi di associazione degli antigeni HLA con le malattie non sono stati ancora completamente decifrati. Essi sono indubbiamente associati alla partecipazione diretta di queste molecole uniche localizzate sulle membrane cellulari nella formazione di complessi intermolecolari, che portano all'attivazione specifica selettiva di cloni di cellule immunocompetenti con funzioni specializzate. L'esistenza di molteplici vie per la formazione di processi immunopatologici riduce l'importanza dei singoli fattori, il che si riflette nella natura relativa dell'associazione degli antigeni HLA con le malattie.

Nel 1973, è stato rilevato un aumento della frequenza di comparsa dell'antigene HLA-B27 in pazienti affetti da spondilite anchilosante. Questo fatto ha dato impulso allo sviluppo del campo dell’immunogenetica clinica “HLA e malattie”. Nell'ambito di questa direzione, è stato riscontrato che una serie di gravi malattie umane sono associate alla presenza di alcune varianti alleliche dei geni HLA nel genoma umano. Esistono anche antigeni HLA che determinano la resistenza dei loro portatori allo sviluppo di questa malattia: antigeni protettivi.

È stata stabilita un'associazione degli antigeni HLA-B8 con malattie di natura autoimmune, in particolare con il lupus eritematoso sistemico - HLA-B7, -B8, -B17, -DR2, -DR3, associazioni di antigeni - HLA-A3-B17, antigeni protettivi in ​​questa malattia - HLA -A11, B15 e B35.

Più spesso di altri, l'antigene HLA-B8 viene rilevato nella dermatomiosite e nell'epatite virale cronica B.

L'antigene HLA-B35 è associato allo sviluppo del diabete mellito di tipo I.

Nella cardiomiopatia ipertrofica esiste un'associazione con gli antigeni di istocompatibilità HLA-B23, -B12, -DR4.

Nell'artrite reumatoide esiste un'associazione della malattia con l'antigene HLA-DR4 e nella malattia di Reiter con l'antigene HLA-B27.

È stata dimostrata l'associazione dell'antigene HLA-B17 con la leucemia linfoblastica acuta.

È stata rilevata una correlazione positiva nell'infezione da HIV con gli antigeni HLA-A1, -A5, -A11, -A23, -A28, -A29, -DR2, -DR5 nonché con le associazioni degli antigeni HLA-B8-DR3, D35-Cw4. Collegamento negativo - con HLA-A9, -A25, -A26, -A32, -B4, -B14, -B18, -B27, -B51, -B57, -DR5, -DR6, -DR7, -DR13.

Nella sclerosi multipla, il ruolo principale appartiene all'antigene HLA-DR2, il decorso recidivante è associato a HLA-DRw17, DQw2, decorso progressivo - con HLA-B7, -B8, DR3, prognosi sfavorevole e decorso grave - con HLA-DR4, -DR7, -DQw8, -DR17, -DQ2, -DR1, -DQ5, prognosi favorevole - con HLA-DQw5.

I fattori predisponenti alla linfogranulomatosi sono HLA-Cw7, -DR5, -DR6, antigeni protettivi - HLA-DR1, -DR7.

L'identificazione di questi antigeni nella fase preclinica della malattia consente di classificare il paziente come a rischio per lo sviluppo di una particolare malattia e, alla comparsa dei primi sintomi clinici, contribuisce alla diagnosi differenziale precoce.

IMMUNOGENETICA DELLA POPOLAZIONE esplora le questioni relative all'origine e all'insediamento dell'umanità sul pianeta. È stato compilato un modello genetico dell'albero genealogico umano, confermato da una ricerca indipendente di archeologi e linguisti basata sull'analisi di monumenti culturali e lingue in vari continenti.

La ricerca degli immunogenetisti ha fornito prove dell'origine africana della specie umana. Sono state prese in considerazione le opzioni per calcolare il percorso genetico minimo, il tasso di cambiamento evolutivo e la correlazione tra la lunghezza dei rami dell'albero genetico e la durata dell'intervallo cronologico per molti sistemi genetici polimorfici. L'origine africana dell'umanità è confermata dall'analisi del DNA mitocondriale, che in Africa è più differenziato rispetto ad altri continenti. Un confronto di questi dati con i risultati della ricerca paleontologica e archeologica ha mostrato che l'umanità, emersa 200mila anni fa in Africa, migrò gradualmente attraverso l'istmo di Suez e si stabilì in Europa e in Asia, da dove ondate migratorie raggiunsero l'America attraverso l'allora sbarcare nello stretto di Bering e in Australia attraverso le isole del Pacifico dopo lo sviluppo della navigazione.

Un aspetto importante dell'immunogenetica è l'analisi della distribuzione degli antigeni HLA nei vari gruppi etnici. Sono state stabilite differenze razziali nella distribuzione degli antigeni HLA: HLA-A1 predomina nei rappresentanti della razza bianca, HLA-A24 e HLA-B54 predominano nei rappresentanti della razza gialla, che non è caratterizzata dalla presenza di HLA-A25, Antigeni HLA-B8 e B18.

I programmi internazionali sull'immunogenetica delle popolazioni hanno permesso di confrontare la distribuzione degli antigeni HLA tra i singoli popoli moderni di tutti i continenti. La distribuzione degli antigeni HLA nelle tipiche popolazioni europee e asiatiche è presentata nella Tabella 3.

Tabella 3

Frequenza di distribuzione degli antigeni HLA tra

alcuni gruppi etnici in Europa e in Asia

(secondo l'11° seminario di istocompatibilità, 1991)

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Antigene HLA-B27

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Data di pubblicazione: 5 febbraio 2013

HLA-B27 è un esame del sangue che rileva una proteina presente sulla superficie dei globuli bianchi. Questa proteina è chiamata antigene leucocitario umano B27 (HLA-B27). Gli antigeni leucocitari umani (HLA) sono proteine ​​che aiutano il sistema immunitario del corpo a distinguere tra le proprie cellule e sostanze estranee e nocive. Il medico può prescriverti questo esame se soffri di dolori articolari, rigidità o gonfiore. Il tipo HLA B27 è associato a malattie autoimmuni come la spondilite anchilosante e la sindrome di Reiter. Il test può essere eseguito insieme ad altri test, tra cui:

• proteina C-reattiva
• Velocità di sedimentazione eritrocitaria
• Fattore reumatoide
• raggi X

Il test dell'antigene HLA viene utilizzato anche in base al tessuto del donatore negli esseri umani. Ad esempio, ciò può essere fatto quando una persona necessita di un trapianto di rene o di midollo osseo.

Risultati normali

Un risultato normale (negativo) significa che l'HLA-B27 non è presente.

Che cosaUNsignificano risultati normali

Un test positivo significa che è presente l'HLA-B27. Ti espone a un rischio superiore alla media di sviluppare alcune malattie autoimmuni. Le malattie autoimmuni sono una condizione che si verifica quando il sistema immunitario attacca e distrugge erroneamente i tessuti sani del corpo. Un risultato anomalo può essere causato da:

• Spondilite anchilosante
• Artrite associata alla malattia di Crohn
• Artrite reattiva
• Sacroileite (infiammazione dell'articolazione sacroiliaca)
• Uveite

Se sono presenti sintomi o segni di malattie autoimmuni, un test HLA-B27 positivo può confermare la diagnosi. Tuttavia, l’HLA-B27 tende a essere trovato in numero basso nei caucasici e non sempre significa che possano avere la malattia.

La versatilità dei geni del complesso maggiore di istocompatibilità umano si riflette nella loro capacità di determinare la suscettibilità di un individuo a una particolare malattia.

La maggior parte del lavoro è stato svolto per rilevare le connessioni correlative tra gli antigeni dei loci HLA-A, B e le malattie, dove sono state ottenute associazioni positive chiare e ripetutamente confermate, alcune delle quali non hanno restrizioni sulla popolazione.

6.2.1. Associazione tra sottoblocchi HLA-A,B e malattie

Per caratterizzare le associazioni sono stati identificati gruppi di malattie la cui incidenza dipende dal fenotipo HLA. I dati principali sono stati riassunti per il simposio “HLA e malattie”, che ha confermato la fattibilità dell'identificazione di gruppi di malattie umane HLA-dipendenti.

Malattie reumatoidi. L'associazione più forte di tutte quelle attualmente conosciute è stata trovata tra la spondilite anchilosante (spondilite anchilosante) e l'antigene HLA-B27. Scoperto per la prima volta nel 1973, è stato confermato con almeno il 95% di confidenza secondo tutti i criteri diagnostici utilizzati.

Nel 1976, più di 800 persone affette da spondilite anchilosante (SA) e un gruppo di controllo di persone sane, composto da oltre 6.300 persone, furono esaminati in Europa, America e Asia (Giappone). Nei pazienti è stato trovato dall'81 al 97% dei portatori di HLA-B27, mentre nelle persone sane solo dal 4 al 12%.

Nei giapponesi sani, l'antigene B27 non viene rilevato, mentre nel 66,7% dei pazienti con AS viene rilevato l'HLA-B27. L'indicatore di rischio relativo per questa patologia è enormemente alto (si avvicina a 100).

È stato condotto un sondaggio in Europa e in America su 320 pazienti con la sindrome di Reiter (il gruppo di controllo era composto da oltre 5.500 persone). L'antigene B27 si trova nel 65-95% dei pazienti e solo nel 4-14% degli individui sani. Il rischio relativo per questa malattia si avvicina a 40.

Un aumento del contenuto di vitamina B27 è caratteristico anche di altre forme di malattie reumatoidi (artrite da Salmonella, artrite da Yersenia). Pertanto, la presenza del gene HLA-B27 costituisce un grave segnale di pericolo che predispone alle malattie reumatoidi; Apparentemente l'antigene da esso determinato è direttamente incluso (vedi 6.2.2) nell'eziologia e nella patogenesi della spondilite anchilosante e della sindrome di Reiter.

Malattie nervose. Un aumento significativo della frequenza degli antigeni interconnessi A1-B8 è stato riscontrato nella miastenia gravis. È stata effettuata un'indagine su 260 pazienti (un gruppo di controllo di 1880 individui sani); mentre l’indice di rischio relativo per europei e caucasici variava da 3 a 6.

Malattie dermatoidi. È stata riscontrata una correlazione positiva tra gli antigeni B13, B37 e B17 (sottoblocco HLA-B) e varie forme di psoriasi (psorias vulgaris, psoriasi non specificata) con un indice di rischio relativo elevato (da 6 a 12). È stata trovata una relazione positiva tra antigeni B8 e dermatite di origine erpetica; l'indicatore di rischio relativo varia da 5 a 25.

Malattie endocrine. Nel diabete giovanile (insulino-dipendente), la frequenza degli antigeni B8, B18, B15 è aumentata. Anche nella tireotossicosi e nel morbo di Addison il contenuto di B8 è elevato. Questi studi sono stati condotti su materiale significativamente inferiore rispetto ai precedenti, e quindi si è creata l'impressione che la predisposizione alle malattie endocrine sia associata non tanto alla presenza di B8, ma all'esistenza di determinanti antigenici ad essa strettamente associati.

Malattie gastrointestinali. La malattia celiaca (forme infantili e giovanili) è quella più studiata; Il numero di pazienti esaminati era di circa 400 persone (il gruppo di controllo era di circa 3000). È stata trovata una chiara associazione positiva di questa malattia con l'antigene B8, con un rischio relativo medio di circa 9.

Immunopatie. In diverse forme di immunopatologia, ad esempio nella sindrome di Sjogren, è stata osservata la loro associazione con B8 con un rischio relativo fino a 3.

Malattie cancerogene. Una generalizzazione dei risultati di una ricerca presso il Registration Center, effettuata nel 1976 (1500 pazienti con malattia di Hodgkin, 5000 gruppo di controllo; 500 pazienti con anemia linfoblastica acuta, 3000 pazienti con malattia di Hodgkin, gruppo I), ha dimostrato che esiste una predominanza di alcuni antigeni HLA ( Al, A9, A10, B5, B8, Bwl8 per la 1a malattia e A2, B8, B12 per la 2a malattia), tuttavia, è statisticamente non significativo: la media del rischio combinato f non supera 1,5.

C'è un certo eccesso di antigeni A10 e B18 nel carcinoma mammario; allo stesso tempo, non sono state ottenute deviazioni significative nella distribuzione degli antigeni HLA nei pazienti con mieloma, linfoma di Burkitt e melanoma maligno.

Il lavoro in questo settore è complicato sia dalla molteplicità delle forme di neoplasie maligne, che si applicano ai tumori diffusi e solidi, sia dalla possibilità di modificare gli antigeni di trapianto sulla membrana cellulare durante lo sviluppo del processo tumorale.

Nella tabella 54 riassume le associazioni più attendibili e più volte confermate tra antigeni dei sottoblocchi HLA-A, B e malattie.

Tabella 54

Le associazioni di malattie più affidabili con antigeni HLA (compilate secondo N. Grumet, 1977; J. de Vries, R. van Rood, 1979)

Per alcune malattie citate nella tabella. 54, esiste una condizionalità geografica e demografica associata alle caratteristiche del linkage disequilibrium nelle diverse popolazioni. Pertanto, è stato dimostrato che il diabete mellito insulino-dipendente nelle popolazioni dell'Europa occidentale è combinato con gli alleli specifici HLA-B8 e B15, mentre negli Stati Uniti - con HLA-B8 (Rubinstein R. et al., 1977; Barbosa B. et al., 1978; Platz P. et al., 1978;

Abbiamo intrapreso [Balabolkin M.I. et al., 1980] per studiare il diabete mellito per chiarire le caratteristiche delle connessioni associative nella popolazione dell'Europa orientale e analizzare l'associazione in varie forme della malattia.

L'esame ha incluso 91 pazienti con diabete mellito, di cui 45 pazienti avevano una forma insulino-dipendente e 46 avevano una forma non insulino-dipendente. Le deviazioni dalla normale distribuzione degli antigeni HLA sono presentate nella tabella. 55.

Analizzando i risultati ottenuti, va notato che l'antigene B8 ha un'elevata frequenza fenotipica nei pazienti di entrambi i gruppi. L'aumento della frequenza dell'antigene A1 nei pazienti è apparentemente associato ad un elevato disequilibrio di collegamento tra gli antigeni B8 e A1. esistenti tra europei e caucasici. Tuttavia, la frequenza dell'antigene B8 e, di conseguenza, il relativo indicatore di rischio nel gruppo di pazienti con diabete mellito insulino-dipendente si è rivelato significativamente più elevato rispetto ai pazienti

Tabella 55

Associazioni positive e negative degli antigeni HLA nei pazienti con diabete mellito,%

con una forma della malattia non insulino-dipendente. Entrambi i gruppi sono caratterizzati da un basso livello di antigene B7. Di conseguenza, la presenza di B8 (forse l'aplotipo A1-B8) è un fattore genetico che predispone allo sviluppo del diabete mellito come una certa forma nosologica. Il trasporto di B7, invece, costituisce un fattore protettivo nello sviluppo di questa malattia (vedi 6.3.1). Associazioni positive e negative riguardanti gli antigeni A1, B8, B7 sono caratteristiche di tutti i gruppi di popolazione studiati affetti da diabete mellito.

Allo stesso tempo, le differenze esistenti nelle associazioni HLA antigeniche tra le due forme di diabete mellito studiate indicano una certa eterogeneità genetica nella sua insorgenza.

Nel nostro studio non è stato possibile ottenere un'associazione positiva tra la forma insulino-dipendente e l'antigene B15, al contrario, la frequenza fenotipica della B15 era quasi equivalente alla distribuzione normale in entrambe le forme di diabete mellito studiate; A quanto pare questo fatto è da attribuire anche alle caratteristiche della popolazione del “nostro” diabete mellito.

Abbiamo studiato due malattie che non sono registrate presso il Centro di Copenaghen dell'OMS come HLA-dipendenti e che presentano un chiaro tropismo clinico associato a danno renale, insufficienza renale cronica (rappresentata da glomerulo e pielonefrite) e amiloidosi, in cui il danno renale è la sindrome principale .

È stato precedentemente dimostrato che nell’insufficienza renale cronica la frequenza dell’antigene HLA-2, il più comune negli europei e nei caucasici, è aumentata (Mickey M. et al.), ma questi dati non sono stati confermati utilizzando il materiale di Mosca: il l'eccesso della frequenza A2 era insignificante (Tabella 56). Allo stesso tempo, è stata rivelata una correlazione positiva con gli antigeni A1, A10, B5 e B8.

Tabella 56

Associazioni positive di antigeni dei sottoblocchi HLA-A e HLA-B con insufficienza renale cronica (secondo A. G. Dolbin e Yu. M. Zaretskaya)

L'amiloidosi, una malattia con frequenti esiti fatali, è una combinazione di diverse forme con eziologia e patogenesi poco chiare [Mukhin N. A. et al., 1979].

Abbiamo esaminato [Mukhin N.A. et al., 1980] 52 pazienti con amiloidosi, nei quali la diagnosi è stata confermata da una biopsia del rene, del fegato, della mucosa rettale e delle gengive: 11 pazienti avevano amiloidosi primaria, 11 avevano amiloidosi ereditaria, 30 avevano amiloidosi secondaria amiloidosi. Tra le cause dell'amiloidosi secondaria c'erano le seguenti: suppurazione cronica, artrite reumatoide, spondilite anchilosante, tubercolosi. La sindrome da danno renale è stata osservata in tutti i pazienti.

L'analisi di correlazione è stata effettuata comparativamente in due gruppi (Tabella 57): il gruppo dell'amiloidosi ereditaria, la cui predisposizione genetica sembrava molto logica, e similmente l'amiloidosi primaria, e il gruppo dell'amiloidosi secondaria, la possibilità di una predisposizione genetica per la quale era problematico.

È stata rilevata una maggiore frequenza dell'antigene HLA-B5 nei pazienti di entrambi i gruppi. Ciò permette di considerare la presenza di questo determinante come un marcatore predisponente allo sviluppo

Tabella 57

Deviazioni significative dalla normale distribuzione degli antigeni HLA nell'amiloidosi

l'amiloidosi è ereditaria, primaria o secondaria. In entrambi i gruppi la frequenza dell'antigene HLA-A3 è risultata sottostimata, per cui in un certo senso A3 può essere considerato un gene protettore (vedi 6.3.1). Pertanto, viene mostrata una certa condizionalità genetica generale nello sviluppo di varie forme della malattia. Per l'amiloidosi secondaria, il numero di antigeni associati è inferiore e i relativi indicatori di rischio sono relativamente piccoli (A1 - 2,1, B27 - 2,9), il che è ovviamente spiegato dal significativo polimorfismo delle malattie che compongono il gruppo dell'amiloidosi secondaria . Un esempio di questa situazione è l'associazione con l'antigene HLA-B27, caratteristica delle malattie reumatoidi incluse in questo gruppo di amiloidosi.

6.2.2. Ipotesi sull'inclusione dei prodotti del complesso HLA nella patogenesi delle malattie

Il flusso di informazioni sull’“interesse” dei primi due sottoblocchi HLA nella patogenesi delle malattie e l’associazione particolarmente elevata tra B27 e il gruppo delle malattie reumatoidi hanno portato alla nascita di una serie di ipotesi, che si basano sul presupposto del coinvolgimento diretto degli antigeni HLA nella patogenesi delle malattie e, di regola, presuppongono la presenza dell'agente infettivo, iniziatore della malattia.

Ipotesi del recettore considera il determinante antigenico HLA come un recettore al quale è attaccata la parte attiva del virus a causa della loro complementarità, il che facilita la penetrazione del virus nella cellula e avvia il processo patologico. Questa ipotesi è però contraddetta dal fatto che la popolazione è colpita quasi al 100% da alcuni virus, indipendentemente dal fenotipo HLA.

Ipotesi del mimetismo molecolare trova maggiore conferma fattuale. Si basa sulla somiglianza strutturale dei determinanti HLA e degli antigeni di alcuni organismi patogeni, per cui il corpo, essendo immunologicamente tollerante ai “suoi” antigeni HLA, è tollerante anche al microbo o virus corrispondente.

Ipotesi di modificazione dell'antigene HLA basato sugli esperimenti di R. Zinkernagel (1974), sopra descritti (vedi 4.3.3). La capacità di un virus di modificare una cellula, da lui scoperta, è stata confermata in esperimenti modello con altri virus.

In questo caso, la cellula può essere distrutta secondo il fenomeno della doppia restrizione o attraverso i meccanismi di sviluppo dell'autoimmunità verso un antigene di istocompatibilità modificato.

Come si può vedere dalle ipotesi sopra discusse, che tentano di includere direttamente gli antigeni HLA nella patogenesi della malattia, non possono spiegare tutte le associazioni dell'HLA con le malattie; il loro umore si basa su “tolleranze” troppo ampie.

Pertanto, sta acquisendo sempre più importanza l'ipotesi sul ruolo dei geni della risposta immunitaria (vedi 6.3), emersa dopo la scoperta dell'associazione dei loci HLA-D e DR con le malattie, alla cui descrizione procediamo.

6.2.3. Associazioni positive tra sottoblocchi HLA-D,DR e malattie

La definizione di collegamenti correlati tra la regione HLA-D,DR e le malattie è stata oggetto di studio e discussione nel 7° workshop (1977) e 8° (1980).

La conclusione generale dell'8° Workshop è che la maggior parte delle malattie precedentemente associate agli antigeni HLA-A,B hanno associazioni più forti con gli antigeni DR e quindi, in larga misura, con gli antigeni DW.

Come hanno dimostrato A. Cudworth e N. Festenstein (1978), l'associazione del diabete insulino-dipendente con gli antigeni Dw3 e Dw4 è più forte che con gli antigeni dei sottoblocchi HLA-B; Il 58% dei pazienti nel campione studiato erano portatori di Dw3 (R = 6,4) e il 42% erano portatori di Dw4 (R = 3,7.

È stato riscontrato che circa il 60% dei pazienti con artrite reumatoide sono portatori di Dw4/DR4, che presentano un elevato disequilibrio di linkage; questa associazione è più elevata di quanto precedentemente notato con l'antigene B15.

L'associazione della sclerosi multipla con Dw2 si è rivelata più significativa dell'associazione precedentemente accertata con l'antigene B7: nel campione esaminato, il 70% dei pazienti era portatore di Dw2 e solo il 40% era portatore di B7.

All'8° Workshop è stato possibile confrontare i dati di diversi laboratori sulla relazione del locus HLA-DR con le malattie (Tabella 58) e identificare il gruppo di antigeni più interessante.

Tabella 58

Elenco delle malattie altamente associate al locus HLA-DR (basato su materiali di P. Terasaki (modifica), Histocompatibility Testing, 1980)

* (Comunicazione consolidata di A. Svejgaard (1980).)

** (Comunicazione congiunta R, Dawkins (1980).)

È stato dimostrato che numerose malattie che includono una componente autoimmune (miastenia gravis, morbo di Graves, diabete giovanile, lupus eritematoso) sono associate agli alleli DR2-DR3-DR4. È stato suggerito che questi determinanti siano bersagli per autoanticorpi citotossici.

[20-072 ] Determinazione dell'antigene HLA-B27 mediante citometria a flusso

4130 rubli.

Ordine

Uno studio per identificare la predisposizione alle malattie del gruppo della spondiloartrite sieronegativa, durante il quale l'antigene HLA-B27 viene determinato mediante citometria a flusso.

Sinonimi russo

• Antigene leucocitario umano B27
• Marcatore immunogenetico HLA-B27
• Diagnosi differenziale delle malattie autoimmuni

SinonimiInglese

• Tipizzazione HLA, citometria a flusso (citofluorimetria a flusso)
• Antigene di istocompatibilità della spondilite anchilosante
• Antigene leucocitario umano della spondilite anchilosante

Metodo di ricerca

Citometria a flusso.

Quale biomateriale può essere utilizzato per la ricerca?

Sangue venoso.

Come prepararsi adeguatamente alla ricerca?

• Eliminare l'alcol dalla dieta per 24 ore prima del test.
• Non mangiare per 12 ore prima del test.
• Evitare completamente l'assunzione di farmaci nelle 24 ore precedenti l'esame (dopo aver consultato il medico).
• Evitare lo stress fisico ed emotivo nelle 24 ore precedenti il ​​test.
• Non fumare per 30 minuti prima del test.

Informazioni generali sullo studio

L'antigene HLA-B27 è una proteina specifica presente sulla superficie delle cellule immunitarie. Appartiene alle proteine ​​del complesso maggiore di istocompatibilità umano, che media varie risposte immunitarie. Il trasporto dell'antigene HLA-B27 è associato ad un aumento del rischio di sviluppare malattie del gruppo delle spondiloartriti sieronegative. Pertanto, questo antigene può essere rilevato nel 90-95% dei pazienti con spondilite anchilosante (malattia di Bechterew), nel 75% dei pazienti con artrite reattiva (sindrome di Reiter), nel 50-60% dei pazienti con artropatia psoriasica, nell'80-90% dei pazienti con spondilite anchilosante giovanile e il 60-90% dei pazienti con artrite enteropatica. La presenza dell'antigene HLA-B27 nei pazienti con altre malattie articolari (gotta, artrite reumatoide, artrite settica) non supera il 7-8%. Considerando questa caratteristica, la rilevazione dell'antigene HLA-B27 è di grande importanza diagnostica nella clinica delle malattie reumatologiche.

La determinazione dell'antigene HLA-B27 è della massima importanza nella diagnosi della spondilite anchilosante precoce. Nella maggior parte dei casi trascorrono 5-10 anni tra la comparsa dei primi segni della malattia e la diagnosi definitiva. Ciò è dovuto al fatto che il principale criterio diagnostico per la malattia sono i segni radiologici della sacroileite, che si sviluppa solo dopo diversi anni di infiammazione delle articolazioni sacroiliache. I pazienti che lamentano mal di schiena senza segni radiologici di sacroileite in realtà non vengono all'attenzione di un reumatologo. Il rilevamento dell'HLA-B27 in una situazione del genere può costituire un motivo sufficiente per indirizzare il paziente a uno specialista specializzato.

La determinazione dell'antigene HLA-B27 è indicata quando si esamina un paziente che lamenta dolore infiammatorio alla schiena in assenza di segni radiologici di sacroileite o quando si esamina un paziente con oligoartrite asimmetrica.

La presenza di HLA-B27 è associata ad un aumentato rischio di manifestazioni extra-articolari di spondilite anchilosante. Le associazioni più significative sono l'antigene HLA-B27 e l'uveite anteriore acuta, l'insufficienza della valvola aortica, la leucemia acuta, la nefropatia da IgA e la psoriasi. HLAB27 – i pazienti positivi sono più a rischio di tubercolosi e malaria. D'altro canto, la presenza dell'HLA-B27 svolge anche un certo ruolo “protettivo”: alcune infezioni virali (influenza, infezione da herpes virus di tipo 2, mononucleosi infettiva, epatite C, ecc.) si manifestano in forma più lieve nell'HLA-B27. portatori.

La determinazione dell'antigene HLA-B27 viene effettuata per prevedere le complicanze dell'artrite reumatoide. La presenza di HLA-B27 è associata ad un aumento di tre volte del rischio di sublussazione atlantoassiale.

Per determinare l'antigene HLA-B27 possono essere utilizzati vari metodi di laboratorio: test linfocitotossico, metodi diagnostici molecolari (PCR), test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) e citometria a flusso. La citometria a flusso è un metodo rapido e affidabile per rilevare l'antigene HLA-B27. Tuttavia, presenta alcune limitazioni di cui è necessario tenere conto durante l'interpretazione del risultato. Pertanto, gli anticorpi monoclonali utilizzati nel test contro l'antigene HLA-B27 non sono assolutamente specifici, ma possono anche reagire con altri antigeni della famiglia HLA-B (principalmente HLA-B7 e, in misura minore, HLA-B40, 73, 22 , 42, 44). Data questa caratteristica, per evitare errori diagnostici, i moderni protocolli per la determinazione dell'antigene HLA-B27 utilizzano doppi anticorpi che consentono di differenziare l'antigene HLA-B27 dagli altri antigeni della famiglia HLA-B. Questo approccio aumenta la specificità e la sensibilità del test rispettivamente al 97,6 e al 98,8%.

Nonostante la presenza di una forte associazione tra l'antigene HLA-B27 e il rischio di sviluppare spondiloartrite, un risultato positivo del test non sempre riflette il rischio reale della malattia in un particolare paziente. Ciò è dovuto al fatto che l'antigene HLA-B27 è rappresentato da 49 varianti diverse, caratterizzate da vari gradi di associazione con questo gruppo di malattie. Pertanto, la variante HLA-B2708 presenta la maggiore associazione con la malattia, mentre le varianti HLA-B2706 e HLA-B2709 non sembrano affatto essere associate al rischio di malattia. Circa il 7-8% delle persone sane nella popolazione europea sono portatori dell'antigene HLA-B27. Ulteriori informazioni sul background genetico del paziente possono aiutare a interpretare un risultato positivo.

Va notato che esistono altri fattori di rischio, sia ereditari che acquisiti, per lo sviluppo della spondiloartrite sieronegativa. L'assenza di HLA-B27 non contraddice la diagnosi di spondilite anchilosante. La spondilite anchilosante viene quindi classificata come HLAB27 negativa.

A cosa serve la ricerca?

1. Per la diagnosi differenziale della sindrome articolare (spondiloartrite sieronegativa, artrite reumatoide e settica, gotta e altri);
2. per lo screening, la diagnosi e la prognosi della spondilite anchilosante;
3. per valutare il rischio di sviluppare sublussazione atlo-assiale nell'artrite reumatoide.

Quando è programmato lo studio?

• Per la sindrome articolare: oligoartrite asimmetrica, soprattutto in combinazione con dolore nella regione lombare di natura infiammatoria (rigidità mattutina per più di 1 ora, miglioramento con l'attività fisica, peggioramento notturno) e segni di entesite;
• con una storia familiare di spondilite anchilosante;
• per l'artrite reumatoide.

Cosa significano i risultati?

Presenza dell'antigene HLA-B27:

• osservato nel 90-95% dei pazienti con spondilite anchilosante e spondilite anchilosante giovanile, così come nel 60-90% con artrite reattiva e nel 50% con artropatia psoriasica;
• osservato nel 7-8% delle persone sane della popolazione europea.

Assenza dell'antigene HLA-B27:

Chi ordina lo studio?

Reumatologo, chirurgo, medico di medicina generale, chiropratico.

Letteratura

• Darke C, Coates E. Tipizzazione HLA-B27/B2708 in un tubo mediante citometria a flusso utilizzando due reagenti anticorpali monoclonali "Anti-HLA-B27". Citometria B Clin Cytom. 2010 gennaio;78(1):21-30.
• Seo BY, Won DI.Tipizzazione dell'antigene leucocitario umano B27 mediante citometria a flusso con campioni conservati per test in lotti. Ann Lab Med. 2013 maggio;33(3):174-83.
• Seipp MT, Erali M, Wies RL, Wittwer C. Tipizzazione HLA-B27: valutazione di un test di fusione PCR allele-specifico e due test dell'antigene citometrico a flusso. Citometria B Clin Cytom. 2005 gennaio;63(1):10-5.
• Levering WH, Sintnicolaas K, Wind H, Hooijkaas H, Gratama JW. Screening citometrico a flusso per l'antigene HLA-B27 sui linfociti del sangue periferico. Curr Protoc Cytom. Agosto 2005;Capitolo 6:Unità6.22. doi: 10.1002/0471142956.cy0622s33.