PHA o reazione di emoagglutinazione passiva, che tipo di esame del sangue è? Interpretazione completa dei test per la sifilide Rpga 1 2560 cosa significa

Uno degli esami del sangue più importanti per il corpo è il test RPHA. Può essere utilizzato per determinare la presenza di agenti patogeni come la sifilide nel corpo. Questa analisi è riconosciuta come uno dei modi più affidabili per determinare se il corpo è affetto da sifilide. Conosciamolo più nel dettaglio.

L'abbreviazione RPHA si riferisce ad una reazione speciale che rivela un'emoagglutinazione passiva nel corpo. Utilizzando questa reazione è possibile rilevare il processo di agglutinazione. Inoltre, durante questo processo, sugli strati superficiali di molti di essi viene rivelata la presenza di antigeni del treponema pallidum. Questo organismo è l'agente eziologico della sifilide.

Una volta nel corpo di una persona sana, Treponema pallidum provoca lo sviluppo di una risposta immunitaria. Durante questo processo, il corpo produce anticorpi non specifici o non treponemici e specifici o treponemici.

La presenza di anticorpi contro Treponema pallidum nel campione di sangue donato è una conferma approfondita della sifilide in laboratorio.

Tutti i test sierologici effettuati in laboratorio sono divisi in due gruppi:

Tipo specifico di studio (treponemico);
Tipo di studio non specifico (non treponemico).

La divisione degli studi in questi gruppi si basa sul tipo di anticorpi rilevati nell'RPHA. La determinazione della reazione di emoagglutinazione passiva o RPHA è un tipo specifico di ricerca in relazione all'agente eziologico della sifilide.

La reazione avviene in presenza di anticorpi antitreponemici. Questa reazione fu praticata per la prima volta da uno degli scienziati nel 1965 e ottenne immediatamente un ampio riconoscimento tra colleghi e pazienti. Oggi, utilizzando questo metodo, viene diagnosticata con successo una malattia del corpo umano come la sifilide. E la metodologia per determinarlo appartiene alla categoria dei test specifici (treponemici).

Utilizzando questo metodo diagnostico altamente sensibile, la presenza di qualsiasi stadio di sifilide nel corpo può essere facilmente determinata:

Primario
Latente
Secondario
Terziario

Maggiori informazioni sulla sifilide possono essere trovate nel video.

Quando si dona sangue per RPGA, i dati delle reazioni di microprecipitazione vengono confermati con una precisione delle frazioni più piccole. L'RPGA consente di identificare i casi falsi positivi di sviluppo della malattia ottenuti durante la procedura.

In alcuni casi, il metodo RPGA può provocare un risultato falso positivo nel paziente.

Ciò accade se una persona ha sviluppato malattie autoimmuni. Se il corpo umano è affetto da un determinato gruppo di malattie virali, durante lo sviluppo delle quali aumenta il numero di anticorpi non specifici del paziente, anche i dati RPGA potrebbero essere falsi. La ragione di ciò è l'uso di globuli rossi sensibilizzati con questo metodo.

Quando è necessario donare il sangue per RPGA?

Un'analisi RPGA viene prescritta a un paziente se vi è il sospetto dello sviluppo di qualsiasi stadio della sifilide nel suo corpo. Inoltre, questa analisi è necessaria per alcune categorie di donne. È nelle fasi iniziali che l'individuazione di questa malattia consentirà di prescrivere un trattamento adeguato e di pianificare una gravidanza, con l'obiettivo di dare alla luce un bambino sano.

La donazione di sangue per determinare la sifilide nel corpo viene prescritta anche durante la preparazione del paziente per l'operazione programmata. È in questo caso che è possibile un esito positivo dell'intervento chirurgico nel corpo. Inoltre, la conferma della presenza di agenti patogeni della sifilide nel corpo consentirà ai medici di pianificare il corso dell'operazione imminente in modo tale che l'effetto terapeutico atteso sia massimo.

La determinazione degli agenti della sifilide nel sangue mediante il metodo RPHA è importante anche per testare i donatori prima di donare il sangue.

Grazie all'RPHA in questo caso è possibile prevenire centinaia di casi di infezione dei riceventi con il sangue di pazienti affetti da sifilide. Allo stesso tempo, ci sono molti casi in cui le persone vengono ai centri di donazione del sangue come donatori e, dopo averlo donato all'RPGA, scoprono di avere la sifilide.

Ci vuole del tempo per determinare gli agenti causali della sifilide nel suo corpo e i risultati diventano noti. Di solito, l'RPGA fornisce un indicatore positivo dopo quattro settimane dall'infezione iniziale.

In molti casi, lo stadio primario della malattia è caratterizzato da tassi ridotti, i suoi dati sono i seguenti: inferiori a 1:320; Lo stadio secondario della sifilide è accompagnato da un aumento dei valori di titolazione: poco più di 1:320. La sifilide latente dà nuovamente titoli bassi.

Dopo aver completato il ciclo di trattamento prescritto per lo stadio stabilito della sifilide, un esame del sangue per RPHA in questo paziente mostra ancora un risultato positivo.

E questo non è un caso isolato, ma diffuso e si conferma per tutta la vita in questa categoria di persone.

Procedura di preparazione e analisi stessa

Prima di donare il sangue, verificare la presenza di agenti patogeni come la sifilide.

Dopotutto, è proprio la distorsione dei dati di un'analisi così importante che può far sì che al paziente venga prescritto il trattamento sbagliato, e questo, come sappiamo, può causare lo sviluppo di altre patologie nel corpo.

La preparazione per questa analisi è abbastanza semplice:

Per cominciare, dovresti rifiutare qualsiasi assunzione di cibo prima di donare il sangue per RPGA. In altre parole, dovresti venire in analisi a stomaco vuoto.
Inoltre, non è consigliabile consumare una quantità significativa di liquidi prima di donare il sangue per RPGA. Anche i componenti delle bevande assunte dal paziente possono influenzare i risultati di questa analisi.
È meglio fare questo test nella prima metà della giornata, poiché sarà abbastanza difficile per te rimanere senza cibo e acqua durante il giorno.
Prima di eseguire il test per l'RPHA, si consiglia al paziente di astenersi dal fumare per trenta minuti. Le sostanze contenute nel fumo di tabacco possono distorcere l'affidabilità dei risultati di questa analisi.
La procedura per prelevare un campione di sangue è abbastanza semplice e quasi indolore. Dopo la procedura, lo specialista di laboratorio fisserà sicuramente un orario in cui potrai venire per i risultati finali.

In caso di sifilide primaria, si esaminano le secrezioni ulcerose o i linfonodi puntati per ricercare il treponema pallidum. In caso di sifilide secondaria, il materiale viene prelevato dalla superficie delle papule erose sulla pelle, dalle mucose, dalle crepe, ecc. Prima di prelevare il materiale per pulire da vari contaminanti, la superficie delle lesioni (erosioni, ulcere, crepe ) deve essere pulito accuratamente con un tampone di garza di cotone sterile, inumidito con una soluzione isotonica di cloruro di sodio o prescrivere lozioni con la stessa soluzione. La superficie pulita viene asciugata con un tampone asciutto e viene utilizzata un'ansa o una spatola di platino per irritare leggermente le aree periferiche, mentre allo stesso tempo si comprime leggermente la base dell'elemento con le dita in un guanto di gomma fino alla comparsa del fluido tissutale (siero), da cui viene preparata la preparazione per la ricerca. Ottenere il fluido tissutale è importante per diagnosticare la sifilide, poiché il treponema pallidum si trova nei lumi dei capillari linfatici, nelle fessure dei tessuti attorno ai vasi linfatici e sanguigni.

Puntura dei linfonodi regionali

La pelle sopra i linfonodi viene trattata con alcol al 96% e soluzione alcolica di iodio al 3-5%. Quindi utilizzare la prima e la seconda dita della mano sinistra per fissare il linfonodo. Con la mano destra, prendere una siringa sterile con alcune gocce di soluzione isotonica di cloruro di sodio, che viene iniettata parallelamente all'asse longitudinale del linfonodo. L'ago viene spinto in diverse direzioni verso la parete opposta della capsula linfonodale e il contenuto della siringa viene iniettato lentamente. Usando le dita della mano sinistra, il linfonodo viene leggermente massaggiato. Quando l'ago viene ritirato lentamente, contemporaneamente viene estratto lo stantuffo della siringa, aspirando il contenuto del linfonodo. Il materiale viene applicato su un vetrino (se la quantità di materiale è piccola, viene aggiunta una goccia di soluzione isotonica di cloruro di sodio) e coperto con un coprioggetto. Lo studio del farmaco nativo viene effettuato in campo visivo oscuro utilizzando un microscopio ottico con condensatore a campo oscuro (obiettivo 40, 7x, 10x o 15x). Il Treponema pallidum si trova anche nei preparati colorati. Se colorati secondo Romanovsky-Giemsa, i treponemi pallidi sono colorati di rosa, secondo Fontan e Morozov - marrone (nero), secondo il metodo Burri, i treponemi non colorati si rivelano su uno sfondo scuro.

Diagnosi sierologica

Le reazioni sierologiche standard (classiche) e specifiche sono di grande importanza nella diagnosi della sifilide, nella valutazione dell'efficacia del trattamento, nella definizione di un criterio di cura e nell'identificazione delle forme latenti e resistenti. Le reazioni sierologiche standard o classiche (SSR) includono:

Reazione di Wasserman (WR),
reazioni sedimentarie di Kahn e Sachs-Vitebsky (citocoliche),
reazione su vetro (metodo espresso),

a specifico:

reazione di immobilizzazione del treponema pallido (reazione del treponema pallido),
reazione di immunofluorescenza (RIF).

Reazione di Wasserman (WR)

- sviluppato da A. Wasserman insieme ad A. Neisser e C. Bruck nel 1906. La reazione di Wasserman si basa sul fenomeno della fissazione del complemento (reazione di Bordet-Gengou) e consente la determinazione di anticorpi antilipidi (reagine). Secondo i concetti moderni, la reazione Wasserman rileva gli anticorpi contro i lipidi del macroorganismo, non contro il Treponema pallidum, e la reazione rivela un processo autoimmune causato dalla denaturazione dei tessuti del macroorganismo da parte del Treponema pallidum con la formazione di un complesso lipoproteico ( coniugato), in cui i lipidi (apteni) sono un determinante.

Il RV viene solitamente diagnosticato con due o tre antigeni. I più comunemente usati sono l'antigene cardiolipina altamente sensibile (estratto di cuore bovino arricchito con colesterolo e lecitina) e l'antigene treponemico (sospensione sonicata di treponemi pallidi coltivati anatogeni). Insieme alle reagine sieriche del paziente, questi antigeni formano un complesso immunitario capace di adsorbire e legare il complemento. Per determinare visivamente il complesso formato (reagine + antigene + complemento), come indicatore viene utilizzato il sistema emolitico (una miscela di eritrociti di pecora con siero emolitico). Se nella fase 1 della reazione (reagne + antigene + complemento) si lega il complemento, non si verifica emolisi: i globuli rossi precipitano in un precipitato facilmente visibile (PB positivo). Se nella fase 1 il complemento non si lega a causa dell'assenza di reagine nel siero in esame, verrà utilizzato dal sistema emolitico e si verificherà l'emolisi (RT negativo). Il grado di gravità dell'emolisi durante la stadiazione del RV è valutato in base ai vantaggi: completa assenza di emolisi ++++ o 4+ (RV è nettamente positivo); emolisi appena iniziata +++ o 3+ (RV positivo); emolisi significativa ++ o 2+ (RV debolmente positivo); quadro poco chiaro dell'emolisi ± (il RV è dubbio); emolisi completa - (reazione Wassermann negativa).

Oltre alla valutazione qualitativa del PB, esiste una valutazione quantitativa con varie diluizioni del siero (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Il titolo della reazione è determinato dalla diluizione massima che dà comunque un risultato nettamente positivo (4+). La stadiazione quantitativa del RV è importante nella diagnosi di alcune forme cliniche di infezione sifilitica, nonché nel monitoraggio dell'efficacia del trattamento. Attualmente, la reazione Wasserman viene eseguita con due antigeni (cardiolipina e ceppo di Reiter sonoro treponemico). Di norma, il RV diventa positivo 5-6 settimane dopo l'infezione nel 25-60% dei pazienti, 7-8 settimane - 75-96%, 9-19 settimane - 100%, anche se negli ultimi anni a volte prima o più tardi . Allo stesso tempo, il titolo della reagina aumenta gradualmente e raggiunge un valore massimo (1:160-1:320 e oltre) in caso di eruzioni cutanee generalizzate (sifilide fresca secondaria). Quando RV è positivo, viene fatta una diagnosi di sifilide sieropositiva primaria.
Con secondario fresco e sifilide ricorrente secondaria, il RV è positivo nel 100% dei pazienti, ma nei pazienti depleti con immunità indebolita si può osservare un risultato negativo. Successivamente il titolo della reagina diminuisce gradualmente e in caso di sifilide secondaria ricorrente solitamente non supera 1:80-1:120.
Per la sifilide terziaria Il RV è positivo nel 65-70% dei pazienti e solitamente si osserva un basso titolo di reagina (1:20-1:40). Nelle forme tardive di sifilide (sifilide degli organi interni, sistema nervoso), il RV positivo si osserva nel 50-80% dei casi. Il titolo della reazione varia da 1:5 a 1:320.
Per la sifilide latente RV positivo si osserva nel 100% dei pazienti. Il titolo della reazione va da 1:80 a 1:640 e con la sifilide latente tardiva da 1:10 a 1:20. Una rapida diminuzione del titolo della reagina (fino alla completa negatività) durante il trattamento indica l'efficacia del trattamento.

Svantaggi della reazione Wasserman- sensibilità insufficiente (negativa nella fase iniziale della sifilide primaria). Risulta negativo anche in 1/3 dei pazienti se sono stati trattati in passato con antibiotici, nei pazienti con sifilide terziaria attiva con lesioni della pelle e delle mucose, dell'apparato osteoarticolare, degli organi interni, del sistema nervoso centrale e con malattie congenite tardive. sifilide.
Mancanza di specificità- la reazione di Wasserman può essere positiva nelle persone che non hanno mai avuto e non hanno la sifilide. In particolare, si osservano risultati RV falsi positivi (non specifici) in pazienti che soffrono di lupus eritematoso sistemico, lebbra, malaria, neoplasie maligne, danni al fegato, infarto miocardico esteso e altre malattie, e talvolta in persone completamente sane.
Viene rilevata una reazione Wasserman falsa positiva a breve termine in alcune donne prima o dopo il parto, nelle tossicodipendenti, dopo l'anestesia o nel consumo di alcol. Di norma, il RV falso positivo è debolmente espresso, spesso con un titolo di reagina basso (1:5-1:20), positivo (3+) o debolmente positivo (2+). Durante le indagini sierologiche di massa, la frequenza dei risultati falsi positivi è dello 0,1-0,15%. Per superare la sensibilità insufficiente si utilizza il test del freddo (reazione di Kolyar) e contemporaneamente si esegue con altre reazioni sierologiche.

Reazioni sedimentarie di Kahn e Sachs-Vitebsky

La reazione Wasserman viene utilizzata in combinazione con due reazioni sedimentarie (Kahn e Sachs-Vitebsky), una volta messi in scena, vengono preparati antigeni più concentrati. Metodo Express (microreazione su vetro) - si riferisce alle reazioni lipidiche e si basa sulla reazione di precipitazione. Viene posto con uno specifico antigene cardiolipina, 1 goccia del quale viene miscelata con 2-3 gocce del siero del sangue in esame nei pozzetti di una speciale lastra di vetro.
Vantaggio- velocità di ricezione della risposta (in 30-40 minuti). I risultati vengono valutati in base alla quantità di sedimento depositato e alla dimensione delle scaglie. L'espressività è definita come CSR - 4+, 3+, 2+ e negativa. Va notato che i risultati falsi positivi si osservano più spesso che con RV. Di norma, il metodo espresso viene utilizzato per esami di massa per la sifilide, per esami nei laboratori diagnostici clinici, nei reparti somatici e negli ospedali. Sulla base dei risultati del metodo express, è vietata la diagnosi di sifilide, il suo utilizzo nelle donne in gravidanza, nei donatori ed è escluso anche per il controllo dopo il trattamento;

Reazione di immobilizzazione del Treponema pallido (TPI)

Reazione di immobilizzazione del Treponema pallido (TPI)- proposto nel 1949 da R. W. Nelson e M. Mayer. È il test diagnostico più specifico per la sifilide. Tuttavia, la complessità e gli alti costi di produzione ne limitano l’utilizzo. Nel siero dei pazienti vengono determinati anticorpi video-specifici (immobilisine), che portano all'immobilità del Treponema pallidum in presenza di complemento. L'antigene è il Treponema pallidum patogeno vivo isolato da conigli infetti da sifilide. Utilizzando un microscopio, viene contata la motilità persa (immobilizzata) del Treponema pallidum e vengono valutati i risultati del RIBT: l'immobilizzazione del Treponema pallidum dal 51 al 100% è positiva; dal 31 al 50% - debolmente positivo; dal 21 al 30% - dubbio; dallo 0 al 20% - negativo.
RIBT è importante nella diagnosi differenziale per distinguere le reazioni sierologiche false positive dalle reazioni causate dalla sifilide. Tardi diventa positivo di RV, RIF e quindi non viene utilizzato per diagnosticare forme infettive di sifilide, sebbene nel periodo secondario della sifilide sia positivo nell'85-100% dei pazienti.
Nel periodo terziario della sifilide con danni agli organi interni, al sistema muscolo-scheletrico e al sistema nervoso, il RIBT è positivo nel 98-100% dei casi ( Il RV è spesso negativo).
Va ricordato che il RIBT può risultare falso positivo se il siero del test contiene farmaci treponemocidi (penicillina, tetraciclina, macroliti, ecc.), che causano l'immobilizzazione aspecifica del Treponema pallidum. A questo scopo, il sangue viene analizzato per RIBT non prima di 2 settimane dopo la fine dell'assunzione di antibiotici e altri farmaci.
RIBT, come RIF, viene lentamente negativizzato durante il processo di trattamento, quindi non viene utilizzato come controllo durante il processo di trattamento.

Reazione di immunofluorescenza (RIF)

Reazione di immunofluorescenza (RIF)- sviluppato nel 1954 da A.Coons e utilizzato per la prima volta per la diagnosi di infezione sifilitica da Deacon, Falcone, Harris nel 1957. Il RIF si basa su un metodo indiretto per la determinazione degli anticorpi fluorescenti. L'antigene per la produzione è il Treponema pallidum patogeno per i tessuti fissato su vetrini su cui viene applicato il siero da testare. Se il siero del test contiene anticorpi anti-treponema legati a IgM e IgG, si legano fortemente all'antigene - treponema, che viene rilevato al microscopio a fluorescenza utilizzando siero fluorescente anti-specie ("anti-umano").
Risultati RIF vengono presi in considerazione dall'intensità del bagliore del treponema pallido nella preparazione (bagliore giallo-verde). In assenza di anticorpi antitreponemici nel siero, il treponema pallidum non viene rilevato. In presenza di anticorpi viene rilevato un bagliore di treponema pallido, il cui grado è espresso in più: 0 e 1+ - reazione negativa; da 2+ a 4+ - positivo.
RIF si riferisce a reazioni treponemiche di gruppo e viene somministrato in una diluizione di 10 e 200 volte del siero in esame (RIF-10 e RIF-200). RIF-10 è considerato più sensibile, ma spesso si ottengono risultati positivi non specifici rispetto a RIF-200 (ha una specificità più elevata). Generalmente, RIF diventa positivo prima di RV- positivo nella sifilide primaria sieronegativa nell'80% dei pazienti, nel 100% nel periodo secondario della sifilide, sempre positivo nella sifilide latente e nel 95-100% dei casi nelle forme tardive e nella sifilide congenita.
Specificità del RIF aumenta dopo il pretrattamento del siero in esame con un antigene treponemico assorbente-ultrasonico, che lega gli anticorpi del gruppo (RIF - abs).
Indicazioni per RIBT e RIF- diagnosi di sifilide latente per confermare la specificità del complesso di reazioni lipidiche in caso di sospetta infezione sifilitica sulla base di un RV positivo. RIBT e RIF positivi sono la prova di sifilide latente. In caso di RV falso positivo in varie patologie (lupus eritematoso sistemico, neoplasie maligne, ecc.) e se i risultati ripetuti di RIBT e RIF sono negativi, ciò indica la natura aspecifica del RV. Sospetto di lesioni sifilitiche tardive degli organi interni, del sistema muscolo-scheletrico, del sistema nervoso se i pazienti hanno RV negativo. Sospetto di sifilide sieronegativa primaria, quando in pazienti con studi ripetuti di secrezione dalla superficie di un'erosione (ulcera), puntura da linfonodi regionali ingrossati, non viene rilevato treponema pallidum - in questo caso viene dato solo RIF - 10.
Quando si esaminano persone con RV negativo che hanno avuto contatti sessuali e familiari a lungo termine con pazienti affetti da sifilide, tenendo conto della probabile possibilità di trattarli nel recente passato con farmaci antisifilitici che hanno causato la negatività del RV. Saggio immunoassorbente legato all'enzima (ELISA - saggio immunoassorbente legato all'enzima) - metodo sviluppato da E. Engvall et al., S. Avrames (1971). L'essenza consiste nel combinare un antigene sifilitico assorbito sulla superficie di un portatore in fase solida con un anticorpo del siero sanguigno in esame e identificare uno specifico complesso antigene-anticorpo utilizzando siero sanguigno anti-specie marcato con enzima. Ciò consente di valutare visivamente i risultati ELISA in base al grado di cambiamento del colore del substrato sotto l'azione dell'enzima incluso nel coniugato. Risultati ELISA inaffidabili possono verificarsi a causa di una diluizione insufficiente degli ingredienti, di una violazione delle condizioni di temperatura e tempo, di un pH incoerente delle soluzioni, di contaminazione della vetreria di laboratorio e di una tecnica errata per il lavaggio dei terreni.

Reazione di emoagglutinazione passiva (RPHA)

Proposto come test diagnostico per la sifilide da T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). La macromodificazione della reazione si chiama TRHA, la micromodifica è MNA-TR, la versione automatizzata è AMNA-TR, la reazione con macrocapsule di poliurea al posto dei globuli rossi è MSA-TR. La sensibilità e la specificità dell'RPGA sono simili a RIBT, RIF, ma l'RPGA ha meno sensibilità nelle forme precoci di sifilide rispetto ai RIF-abs e maggiore sensibilità nelle forme successive di sifilide congenita. RPGA viene fornito in versioni qualitative e quantitative.

Tecnica di prelievo del sangue per test sierologici

Per studiare RV, RIF, RIBT, il sangue viene prelevato dalla vena ulnare a stomaco vuoto o non prima di 4 ore dopo un pasto utilizzando una siringa sterile o un ago (per gravità). Nel luogo di raccolta, la pelle viene pretrattata con alcol al 70%. La siringa e l'ago devono essere lavati con una soluzione isotonica di cloruro di sodio. 5-7 ml di sangue da analizzare vengono versati in una provetta pulita, asciutta e fredda. Sulla provetta viene incollato un foglio di carta bianco con il cognome, le iniziali, l’anamnesi o il numero della tessera ambulatoriale del paziente e la data del prelievo di sangue. Dopo il prelievo del sangue la provetta viene posta in frigorifero ad una temperatura di +4°+8°C fino al giorno successivo. Il giorno successivo, il siero viene drenato per essere analizzato. Se il sangue non viene utilizzato il giorno successivo, il siero deve essere drenato dal coagulo e conservato in frigorifero per non più di 1 settimana. Per il test RIBT, la provetta deve essere appositamente preparata e sterile. In caso di violazione delle regole per la raccolta del sangue a fini di ricerca, il mancato rispetto delle condizioni può comportare la distorsione dei risultati.
Non è consigliabile prelevare il sangue per i test dopo aver mangiato, bevuto alcolici, assunto vari farmaci, dopo aver somministrato vari vaccini o durante il ciclo mestruale nelle donne.
Per la ricerca utilizzando il metodo express, il sangue è stato prelevato dalla punta del dito, come si fa quando lo si prende per la VES, ma il sangue è stato prelevato da 1 capillare in più. Il metodo express può essere eseguito anche con siero sanguigno ottenuto mediante venipuntura. Se è necessario eseguire analisi del sangue in laboratori remoti, è possibile inviare siero secco al posto del sangue (metodo goccia secca). Per fare questo, il giorno successivo al prelievo del sangue, il siero viene separato dal coagulo e aspirato in una siringa sterile nella quantità di 1 ml. Quindi il siero viene versato sotto forma di 2 cerchi separati su una striscia di carta spessa (carta oleata o cellophane) di 6x8 cm. Sul bordo libero del prelievo di sangue vengono scritti il cognome, le iniziali del soggetto e la data del prelievo di sangue carta. La carta con il siero viene protetta dalla luce solare diretta e lasciata a temperatura ambiente fino al giorno successivo. Il siero si asciuga sotto forma di piccoli cerchi di una pellicola vetrosa giallastra lucida. Successivamente, strisce di carta con siero essiccato vengono arrotolate come polvere farmaceutica e inviate al laboratorio, indicando la diagnosi e lo scopo per cui viene esaminato.

Resistenza sierologica

In alcuni (2% o più) pazienti affetti da sifilide, nonostante la terapia antisifilitica completa, si osserva un rallentamento (assenza) di reazioni sierologiche negative dopo la fine del trattamento fino a 12 mesi o più. Si verifica la cosiddetta resistenza sierologica, che negli ultimi anni è stata osservata frequentemente. Esistono forme di resistenza sierologica:

VERO(assoluto, incondizionato) - è necessario effettuare un ulteriore trattamento antisifilitico, combinandolo con una terapia non specifica per aumentare le forze immunitarie del corpo.
Parente- dopo il trattamento completo, il treponema pallidum forma cisti o forme L, che si trovano nel corpo in uno stato a bassa virulenza e, di conseguenza, un trattamento aggiuntivo non modifica gli indicatori delle reazioni sierologiche, in particolare RIF e RIBT.

Allo stesso tempo, nelle forme di cisti si verificano processi metabolici minori e il guscio delle forme di cisti è una proteina estranea (antigene). Per proteggersi l'organismo produce anticorpi specifici, che risultano positivi o fortemente positivi quando si effettuano reazioni sierologiche e non vi sono manifestazioni della malattia. Con le forme L, i processi metabolici sono più ridotti e le proprietà antigeniche sono assenti o poco espresse. Gli anticorpi specifici non vengono prodotti o sono in piccole quantità, le reazioni sierologiche sono debolmente positive o negative. Quanto più lungo è il periodo di tempo dal momento dell'infezione, tanto maggiore è il numero di Treponema pallidum che si trasformano in forme di sopravvivenza (cisti, spore, L-forme, grani), nelle quali la terapia antisifilitica non è efficace.

Pseudoresistenza- dopo il trattamento, nonostante le reazioni sierologiche positive, il Treponema pallidum è assente nell'organismo. Non c'è antigene nel corpo, ma continua la produzione di anticorpi, che vengono rilevati durante le reazioni sierologiche.
La resistenza sierologica può svilupparsi a causa di:

trattamento inadeguato senza tener conto della durata e dello stadio della malattia;
dose insufficiente e in particolare dovuta alla mancata considerazione del peso corporeo dei pazienti;
violazione dell'intervallo tra la somministrazione del farmaco;
persistenza del treponema pallidum nell'organismo nonostante un trattamento specifico completo, a causa della resistenza alla penicillina e ad altri farmaci chemioterapici in presenza di lesioni nascoste e incistate negli organi interni, nel sistema nervoso, nei linfonodi, che sono inaccessibili ai farmaci antibatterici (treponema pallidum si riscontrano spesso nei tessuti cicatriziali molti anni dopo la fine della terapia, nei linfonodi è talvolta possibile rilevare treponema pallidum 3-5 anni dopo la terapia antisifilitica);
riduzione delle forze protettive in varie malattie e intossicazioni (endocrinopatie, alcolismo, tossicodipendenza, ecc.);
esaurimento generale (mangiare cibi poveri di vitamine, proteine, grassi).

Inoltre, viene spesso rilevata una falsa positività delle reazioni sierologiche, che non è associata alla presenza di sifilide nei pazienti ed è causata da:

concomitanti malattie non specifiche degli organi interni, disturbi del sistema cardiovascolare, reumatismi, disfunzione del sistema endocrino e nervoso, gravi dermatosi croniche, neoplasie maligne;
danni al sistema nervoso (lesioni gravi, commozioni cerebrali, traumi mentali);
gravidanza; intossicazione cronica da alcol, nicotina, droghe; malattie infettive (malaria, tubercolosi, epatite virale, dissenteria, tifo, febbre tifoide e ricorrente).

Questi fattori possono influenzare la reattività immunologica del corpo sia durante il periodo di sviluppo attivo delle manifestazioni sifilitiche sia durante la loro regressione.

Al giorno d'oggi, per condurre RPGA vengono utilizzati kit di test standardizzati.

Hanno tutto il necessario per l'analisi:

Una bottiglia con globuli rossi che contengono antigeni del ceppo Treponema pallidum Nichols sulla superficie.
La stessa capacità, ma con globuli rossi “puri” (necessari per il controllo).
Una soluzione tampone per diluire il siero del paziente (di seguito vi spiegheremo perché ciò avviene).
Per il controllo viene utilizzato anche il siero di una persona nota per la sifilide (K+).
Siero di una persona sana conosciuta (K–).
Piastra in plastica con pozzetti numerati per miscelare i campioni e valutare i risultati.

Ogni kit di test contiene una fornitura di reagenti per un certo numero di campioni. Di solito - 100. Pertanto, il siero a volte viene conservato fino a quando non viene raccolto il numero richiesto di campioni per la ricerca.

Metodologia per l'analisi RPGA

Il test di emoagglutinazione passiva può fornire due tipi di risultati:

Qualitativo. Fornisce una risposta alla domanda se il campione da analizzare contiene anticorpi contro l'agente patogeno.
Quantitativo. Consente di valutare l'intensità della sintesi immunoglobulinica e quindi di monitorare l'attività dell'infezione.

In genere, viene effettuata prima una valutazione qualitativa e poi vengono selezionati i campioni positivi per gli studi quantitativi.

L'algoritmo per il rilevamento semplice dell'infezione è il seguente:

Dosi uguali dei campioni da testare vengono aggiunte ai pozzetti della piastra. Ad ogni paziente viene assegnata una fila di sei fori.
Le prime due gocce sono il suo plasma, diluito con un tampone 1:20.
La coppia successiva serve da siero di controllo; E altri due fori per il materiale K–.
Quindi i globuli rossi marcati con l'antigene vengono aggiunti al primo pozzetto di ciascuna coppia. In secondo luogo, i globuli rossi sono puliti.
La compressa viene agitata per un po' per miscelare accuratamente i reagenti e lasciata in pace. Minimo – 45 minuti. Puoi farlo tutta la notte.

I risultati vengono valutati visivamente. Se la reazione è negativa, i globuli rossi si depositano sul fondo della depressione sferica del foro.

Ciò dovrebbe verificarsi in entrambi i pozzetti contenenti i campioni dei pazienti e in cui sono stati aggiunti i globuli rossi del sistema di test di controllo puro.

Se il risultato è positivo, i globuli rossi non si raccolgono in un unico punto, ma sono distribuiti uniformemente sul fondo del pozzetto. Un quadro simile si dovrebbe osservare laddove i globuli rossi marcati con l'antigene standard vengono miscelati con il campione di un paziente e il siero K+. In questo modo la reazione viene monitorata evitando risultati falsi.

Valutazione quantitativa dell'RPGA

I campioni positivi vengono raccolti e diluiti più volte con una soluzione tampone (titolata). Prima di ogni diluizione, il siero viene fatto cadere nell'apposito pozzetto della piastra e sopra di esso viene annotato il grado di diluizione totale. Quindi ai campioni vengono aggiunti globuli rossi con antigene del treponema e viene determinato a quale titolo si osserva ancora un risultato positivo. Questo è un esame del sangue quantitativo per la sifilide RPHA, mostra la concentrazione di anticorpi contro l'agente patogeno.

I risultati vengono valutati come segue:

4+ significa che i globuli rossi rivestono il fondo del pozzetto in uno strato uniforme. L'aspetto della piegatura dei bordi indica elevate concentrazioni di anticorpi nel campione da testare. La reazione è positiva.
Viene assegnato 3+ se il cerchio è chiaro, ma alcuni globuli rossi “scorrono” verso il centro. L'immagine ricorda un ombrello teso ed è considerata una reazione positiva.

2+ si presenta come un anello largo con tendenza a schiarirsi al centro. Debolmente positivo.
1+ significa risultato discutibile. C'è un anello stretto nel foro. Richiede la ripetizione in 1-2 settimane.
In un test negativo, i globuli rossi formano un pulsante al centro del pozzetto.

Esistono però casi di sifilide sieroresistenti, in cui la malattia sembra scomparsa e gli anticorpi persistono a lungo. Pertanto, RPGA a volte richiede conferma con altri metodi.

Se è necessario superare l'RPGA e sottoporsi a qualsiasi esame per la sifilide, contattare venereologi competenti.

Test di emoagglutazione del Treponema pallidum (TPHA)

Cos'è una reazione di emoagglutinazione passiva?

La reazione di emoagglutinazione passiva (Treponema pallidum hemagglutination assay) si basa sulla determinazione dell'agglutinazione degli eritrociti, sulla cui superficie sono fissati gli antigeni del Treponema pallidum, che avviene solo in presenza di anticorpi anti-treponema. Rathlev nel 1965 ed è ampiamente utilizzato per la sierodiagnosi della sifilide ed è classificato come test specifico (treponemico).

Quando viene prescritto l'RPGA?

L'RPGA è prescritto per la conferma di laboratorio di tutti gli stadi della sifilide. In conformità con l'ordinanza del Ministero della Salute russo n. 87 del 26 marzo 2001, un esame del sangue nel test RPGA in combinazione con il test ORS sostituisce la procedura. KSR(un complesso di reazioni sierologiche alla sifilide). L'RPGA non viene utilizzato come reazione singola per la conferma di laboratorio della diagnosi di sifilide, ma è più spesso utilizzato in combinazione con ORS (RPR) E RIF (ALS) .
L'RPHA può e viene utilizzato per lo screening della sifilide in alcuni paesi sotto forma di test di microagglutinazione modificato (saggio di microemoagglutinazione per anticorpi contro Treponema pallidum - MHA-TP).

Come viene valutato l'RPGA?

L'RPHA diventa positivo 4 settimane dopo l'infezione primaria, con la sifilide primaria si notano bassi titoli di reazione (meno di 1:320), con la sifilide secondaria i titoli di reazione aumentano (più di 1:320), con la sifilide latente i titoli di reazione diminuiscono nuovamente a basso Dopo il trattamento della sifilide, l'RPGA rimane positivo per tutta la vita in quasi tutti i pazienti. In questa tabella viene presentata l'interpretazione dei risultati dell'RPGA in combinazione con RMR e RIF.

RPR,VDRL	RIF (ALS)	RPHA (TPHA)	Interpretazione
			nessuna sifilide o periodo di incubazione o stadio molto precoce
			sifilide non trattata o trattata di recente
			sifilide primaria o RPR e RIF falsi positivi
			falsi positivi RPR e RPGA o falsi negativi RIF
			sifilide trattata o sifilide tardiva non trattata
			reazione biologica falsa positiva
			sifilide primaria precoce o sifilide trattata di recente o RIF falso positivo
			sifilide trattata o RPGA falso positivo

Dove posso ottenere maggiori informazioni?

Preferiti

Test treponemico di emoagglutinazione per la sifilide (J Clin Microbiol. 1983) Testo completo
Valutazione del test treponemico di emoagglutinazione per la sifilide J Clin Microbiol. Giugno 1984

Forse ti è stato indirizzato un laboratorio per l'analisi RPGA, ma non capisci veramente cosa significhi questa abbreviazione. Cos'è e quanto è grave, imparerai in dettaglio da questo articolo.

Oltre ai pazienti con sintomi gravi di malattie sessualmente trasmissibili, l'invio per l'analisi RPGA può essere dato alle persone che si sottopongono a una visita medica allo scopo di trovare lavoro, prima di sottoporsi a un intervento chirurgico o quando una donna si registra per una gravidanza. Non c'è nulla di spaventoso o vergognoso qui, è solo che gli specialisti analizzano la popolazione per gravi malattie sessuali, il che consente di identificare tempestivamente i portatori dell'infezione e fornire loro cure mediche adeguate anche prima che si sviluppino complicazioni.

Se pratichi rapporti sessuali non protetti (non importa quanto bene conosci il tuo partner sessuale, perché molte persone non sono consapevoli della loro infezione), o sospetti il tuo partner abituale, puoi donare il sangue in tutta sicurezza e scoprire presto il risultato e dissipare la paura di sconosciuto. Per ottenere un rinvio per analisi di laboratorio, non è necessario rivolgersi a un venereologo. È sufficiente contattare il tuo terapista con questa richiesta o informare il tuo ginecologo o urologo dei tuoi inquietanti sospetti.

Trascrizione dell'analisi

RPHA sta per reazione di emoagglutinazione passiva. È necessario conoscerne il significato quando si determina la presenza dell'agente eziologico di una grave malattia venerea: la sifilide. Se il corpo umano è stato colpito da un'infezione, ciò può essere rilevato con precisione utilizzando i risultati di un esame del sangue.

Durante lo studio, uno specialista può rilevare l'agglutinazione dei globuli rossi, il che significa che i globuli rossi hanno iniziato a unirsi e precipitare sotto qualche influenza negativa. In questo caso si tratta del treponema pallidum, che vive negli strati superiori e provoca la sifilide nel corpo.

Il meccanismo dell’infezione è abbastanza semplice:

C'è un corpo sano;
Vi entra un microrganismo patogeno, Treponema pallidum;
Si sviluppa una risposta immunitaria;
Ciò a sua volta provoca la produzione di anticorpi, che sono un segno di una malattia a trasmissione sessuale esistente.

Un esame del sangue per RPHA è caratterizzato da due tipi di anticorpi, che indicano la presenza o l'assenza dell'agente eziologico della sifilide:

Non specifico e non treponemico;
Specifico e treponemico.

Questa tecnica di ricerca è stata utilizzata per la prima volta nel 1965. Da allora, è stato utilizzato attivamente per diagnosticare la sifilide. La sua elevata sensibilità consente non solo di rilevare l'agente patogeno, ma anche di determinare lo stadio in cui si manifesta la malattia.

Esistono quattro forme conosciute di sifilide:

Primario;
Secondario;
Terziario;
Latente.

Con lo sviluppo di patologie autoimmuni, sullo sfondo di alcune malattie virali, può aumentare il numero di anticorpi non specifici nel corpo del paziente, il che verrà percepito dall'analisi RPGA come una falsa reazione.

L'esame del sangue RPGA è indicato per tutti i pazienti che hanno avuto disturbi simili ai segni della sifilide o quando il medico sospetta qualcosa di simile in base alla sua vasta esperienza pratica.

È anche molto importante che alcune rappresentanti di sesso femminile che pianificano una gravidanza presto si sottopongano a un esame simile. Perché nel loro caso devono sottoporsi a cure e poi pensare ad avere un figlio solo se, ovviamente, la loro salute è importante per loro.

Questa analisi è spesso inclusa nel gruppo degli esami obbligatori prima dell'intervento chirurgico. Grazie ad una diagnosi completa del corpo, è possibile pianificare il corso dell'operazione e il suo esito favorevole.

Come sostenere questo test

Probabilmente capisci quanto può essere seria una diagnosi basata sui risultati dell'analisi RPGA.

A volte la conclusione è errata a causa della scarsa preparazione del paziente allo studio, motivo per cui una risposta falsa positiva diventa motivo per prescrivere trattamenti inutili o, al contrario, dannosi.

Per evitare distorsioni dei risultati del test, è sufficiente seguire le raccomandazioni seguenti:

Non dovresti mangiare alcun cibo alla vigilia della donazione di sangue per RPGA. Questa analisi, come la maggior parte delle altre, viene eseguita rigorosamente a stomaco vuoto;
Anche qualsiasi bevanda diversa dalla semplice acqua pulita non dovrebbe entrare nel corpo nel giorno assegnato per l'analisi. Se bevi liquidi consentiti, il suo volume dovrebbe essere minimo in modo da non influenzare la composizione del sangue;
Di solito, affinché una persona non muoia di fame e di sete, il sangue viene prelevato al mattino;
È meglio non fumare affatto stamattina. Le sostanze contenute nei fumi e nei vapori possono dare una reazione negativa, per cui i risultati verranno interpretati in modo errato dall'assistente di laboratorio;
Il divieto vale anche per gli alcolici. Inoltre, è meglio smettere di bere alcolici qualche giorno prima del test.

Arrivando in una stanza speciale, il paziente deve esporre il braccio dagli indumenti in modo che l'infermiera possa prelevare il sangue da una vena. Questa procedura è nota a quasi tutti. È relativamente indolore e veloce. Al termine ti verrà comunicato quando i risultati dell'analisi RPGA saranno pronti per poter essere raccolti.