Risultato positivo del test immunologico cutaneo. Test cutanei per allergeni

I test cutanei vengono utilizzati per identificare le malattie allergiche mediate da reazioni di ipersensibilità di tipo I e IV. La tecnica per eseguire i test cutanei è descritta nella lettera metodologica di A.D. Ado et al. (“L'uso di allergeni di origine non infettiva per la diagnosi specifica e la desensibilizzazione di pazienti con malattie allergiche”, M., Ministero della Salute dell'URSS, 1969). I test cutanei utilizzano allergeni standard contenenti 10.000 unità di azoto proteico (PNU) per ml. Di norma, i test cutanei vengono eseguiti sulla superficie interna dell'avambraccio. Allo stesso tempo, vengono prelevati campioni con liquido di controllo e istamina. Per le malattie della pelle i test vengono eseguiti su aree non interessate da danni. Attualmente vengono utilizzati i seguenti test cutanei: drop test, patch test, prick test, scarificazione test, test intradermico.

Prova di caduta

Una goccia di un allergene standard viene applicata sulla pelle precedentemente sgrassata con alcol al 70%. La reazione viene valutata dopo 20 minuti. La valutazione del campione è riportata nella Tabella 15-1.

Eliminare la valutazione del campione

Prova applicativa

Un pezzo di garza (1 cm3), inumidito con una soluzione allergenica, viene applicato sulla pelle pretrattata con alcool al 70% e fissato con un cerotto adesivo. La reazione viene presa in considerazione dopo 30, 60 minuti, 6 ore, 12 ore, 24 ore, 48 ore, 72 ore. La valutazione del patch test è riportata nella Tabella 15-2.

Valutazione del patch test

Prova del cazzo

Il prick test viene eseguito con una speciale lancetta. Il dispositivo utilizzato consente di standardizzare la profondità di iniezione (1,0-1,5 mm). L'iniezione viene eseguita attraverso una goccia di allergene e liquido di controllo. Il risultato del prick test viene preso in considerazione dopo 15-20 minuti. I punteggi del prick test sono mostrati nella Tabella 15-3.

Valutazione dei prick test.

Prova di scarificazione

Sull'avambraccio, trattato con alcool al 70%, istamina allo 0,01%, si applicano goccia a goccia liquido di controllo e allergeni (6-10 allergeni alla volta) ad una distanza di 4-5 cm l'uno dall'altro. Utilizzando uno scarificatore, dopo ogni goccia vengono applicati due graffi paralleli lunghi 4-5 mm e distanti 2 mm. I graffi vengono effettuati superficialmente senza danneggiare i vasi cutanei. 10 minuti dopo la scarificazione della pelle, le gocce vengono asciugate con tamponi di cotone. I campioni vengono contati dopo 10-20 minuti. Il punteggio degli scratch test è riportato nella Tabella 15-4.

Valutazione dei test di graffio.

Va ricordato che i test antigraffio spesso danno reazioni false positive.

Test intradermici

Eseguito, di regola, con allergeni microbici. Con gli allergeni non infettivi, viene eseguito solo nei casi in cui i patch test e i prick test danno un risultato negativo e l'anamnesi indica chiaramente un'allergia.

La tecnica del test è la seguente: dopo aver trattato la pelle dell'avambraccio o della schiena con alcool a 70°, si iniettano per via intradermica 0,02-0,1 ml dell'allergene con una siringa da insulina. L'allergene somministrato per via intradermica dovrebbe essere 10 volte meno concentrato rispetto allo scratch test. Come controllo, un liquido di controllo e una soluzione di scarificazione con istamina vengono iniettati per via intradermica. I risultati del test vengono presi in considerazione dopo 20 minuti, 6 ore, 12 ore, 24 ore, 48 ore secondo la scala di valutazione, poiché le reazioni agli allergeni infettivi possono verificarsi sia in forma immediata che ritardata.

Va ricordato che i test intradermici sono meno specifici dei test cutanei e molto spesso danno risultati falsi positivi e falsi negativi. Per i test intradermici, il numero simultaneo di allergeni da testare non deve superare 4-5.

Valutazione dei test intradermici

TEST SULLA PELLE- un metodo diagnostico per identificare la sensibilizzazione specifica del corpo umano o animale introducendo un allergene attraverso la pelle e valutare la reazione infiammatoria della pelle.

Esistono due metodi di K. p. Il metodo diretto, quando l'allergene viene somministrato senza danni o con danni alla pelle, può essere flebo, applicazione (epicutanea o patchwork), scarificazione, prova di iniezione e intradermica. Il metodo diretto prevede anche prove a freddo e termiche. Il metodo indiretto è la reazione di trasferimento passivo di Prausnitz-Küstner (vedi reazione di Prausnitz-Küstner), quando il siero del paziente con gli anticorpi in esso contenuti viene iniettato per via intradermica in una persona sana, seguito dall'introduzione di un allergene nello stesso punto, a cui il paziente è sensibile. Questa tecnica viene utilizzata quando il test cutaneo diretto è impossibile o molto pericoloso (ad esempio, nell'ipersensibilità di tipo anafilattico alla penicillina) ed è necessaria una diagnosi specifica.

A seconda del momento in cui si verifica la reazione infiammatoria, si distingue tra tipi immediati (reazioni allergiche di tipo I e III) e ritardati (reazioni allergiche di tipo IV) (vedi Allergia). Il meccanismo di tipo immediato K. si basa sul fatto che quando il corpo è sensibilizzato, le reagine si fissano non solo nei tessuti degli organi “shock” (vedi Anafilassi), ma anche nelle cellule della pelle. Quando un allergene specifico (antigene) viene applicato sulla pelle, si verifica una reazione allergene-anticorpo e vengono rilasciate sostanze biologicamente attive (vedi Mediatori delle reazioni allergiche). Dopo 15-20 minuti. si forma una vescica, circondata da una zona di iperemia, reazione infiammatoria di tipo vescicolo-eritematoso (reazione di tipo I). In una reazione di tipo III, si sviluppano gonfiore e iperemia nel sito di iniezione dell'allergene. Questi cambiamenti si verificano dopo 3-4 ore e raggiungono il massimo dopo 7-8 ore. e scompaiono dopo 24 ore. Il Kp di tipo III è considerato una manifestazione di reattività allergica come il fenomeno di Arthus (vedi fenomeno di Arthus) e dipende dalla presenza di precipitine circolanti. Per reazioni ritardate che si verificano dopo 24-48 ore. dopo l'esposizione ad un allergene, le cellule linfoidi prendono parte alla formazione dell'infiltrato nel sito del K. p. Quando i recettori dei linfociti interagiscono con un allergene, i mediatori vengono rilasciati dai linfociti, causando lo sviluppo di una reazione infiammatoria.

La scelta della tecnica del test cutaneo dipende dalla malattia, dal grado e dal tipo di ipersensibilità allergica prevista (immediata, ritardata), nonché dal gruppo di allergeni da testare. Con maggiore sensibilità alle sostanze chimiche semplici. sostanze, alcuni farmaci, ecc., espressi clinicamente come dermatite allergica da contatto, solo gli elementi dell'applicazione K. hanno valore diagnostico Per l'asma bronchiale, la rinite allergica, il raffreddore da fieno, in cui è prevista una maggiore sensibilità agli allergeni di origine non batterica, lo studio. inizia con un'iniezione di prova o un prick test. In caso di orticaria, edema di Quincke, allergie alimentari ed emicrania, è meno comune rilevare le allergie utilizzando K. p., poiché danno risultati negativi con un numero di allergeni alimentari che, se consumati per os, causano una malattia chiaramente definita . K. p. con i farmaci non sono affidabili. K. p. negativo non significa che non vi sia sensibilizzazione a questo allergene, poiché in questi casi si verificano gravi reazioni anafilattiche. Gli allergeni batterici vengono solitamente testati per via intradermica (ad eccezione del test Pirquet). Con la tecnica della scarificazione non danno risultati sufficientemente netti, ciò è dovuto al minor contenuto di sostanze specifiche rispetto agli estratti non batterici.

Quando si mette in scena K., è necessario tenere conto della disuguale reattività della pelle. La pelle più sensibile è la superficie anteriore dell'avambraccio, del torace, dell'addome, della schiena vicino alla colonna vertebrale e sopra le scapole. Sulla fossa ulnare la reazione è più forte, ma meno specifica. La sensibilità della pelle durante un'esacerbazione della malattia o immediatamente dopo è meno pronunciata. Quando si mette in scena K., raramente si verificano reazioni generali come lo shock anafilattico (vedi). Le complicazioni si osservano più spesso quando si utilizzano allergeni così forti come allergeni provenienti da polline di piante, peli di animali ed epidermide, corpi di insetti e siero animale. Il pericolo maggiore deriva dai farmaci, in particolare dagli antibiotici (soprattutto la penicillina). I test con la penicillina dovrebbero essere eseguiti quando assolutamente necessario, utilizzando diluizioni molto elevate; Lo studio inizia applicando una goccia della soluzione test sulla pelle e solo se la reazione è negativa viene eseguito un scratch test. Per prevenire reazioni generali come lo shock anafilattico, il test degli allergeni non batterici dovrebbe iniziare con il metodo di scarificazione, osservando rigorosamente tutte le precauzioni necessarie, e solo se i risultati sono negativi passare al metodo intradermico. A causa del fatto che non esiste una corrispondenza completa tra la sensibilità allergica della pelle e gli organi "shock", nella diagnosi specifica delle malattie allergiche non si può fare affidamento solo sui risultati di K. p. K. p significato quando il suo risultato corrisponde pienamente ai dati anamnestici. Se i dati dell'anamnesi non corrispondono ai risultati di K. p., vengono utilizzati altri metodi di ricerca: in vivo - test provocatori (vedi), in vitro - determinazione degli anticorpi IgE nel sangue utilizzando il metodo radioallergoassorbente, test di rilascio specifico dell'istamina , test dei basofili (vedi), ecc. d.

I test di gocciolamento vengono utilizzati per rilevare la sensibilizzazione ai farmaci, principalmente agli antibiotici. Si utilizzano basse concentrazioni di sostanze: soluzione di novocaina allo 0,25%, antibiotici da 0,5 a 100 U/ml, soluzione di resorcina al 2,5%, ecc. Sulla pelle dell'addome o sulla superficie anteriore dell'avambraccio, pretrattata con alcol al 70%, applicare una goccia della sostanza in esame e tracciare l'area del campione con una matita. Allo stesso tempo, viene posizionato un kit di test di controllo con un solvente. Per rilevare la reattività cutanea viene utilizzata una soluzione di istamina allo 0,01%: un controllo positivo. Prendere in considerazione la reazione immediata (entro 20 minuti) e ritardata (entro 24-48 ore). In caso di reazione positiva, nel sito di applicazione di una goccia della sostanza si sviluppano eritema, edema, papule ed elementi vescicolari. In caso di reazione negativa si procede alla scarificazione.

Prove applicative sono utilizzati dal prof. malattie della pelle e sono test provocatori in cui una quantità nota della sostanza in esame viene applicata su un'area della pelle della superficie anteriore dell'avambraccio, della schiena o dell'addome che non è danneggiata dalla dermatite per riprodurre il processo in miniatura. Gli articoli dell'applicazione K. sono più facili da controllare rispetto alle reazioni con danni cutanei più profondi (scarificazione e intradermica). Esistono test applicativi chiusi e aperti. Quelli aperti vengono utilizzati per sostanze oleo-resinose o fluide. La sostanza viene applicata direttamente sulla pelle (coloranti, cosmetici), oppure sotto forma di “finestra cutanea”, attraverso la quale si osserva la reazione: la pelle viene trattata con alcool al 70% ed essiccata; Successivamente, un pezzo quadrato di cellophane o vetro viene fissato su tre lati con un cerotto adesivo e il liquido di prova viene iniettato nella tasca risultante. I test delle applicazioni chiuse vengono eseguiti come segue. Sulla superficie della pelle viene posto un pezzo quadrato di garza di 1 cm2, inumidito con la soluzione di prova. Copri la parte superiore con un pezzo di cellophane o carta oleata leggermente più grande e sigillalo in modo che la garza non si estenda oltre il bordo dell'adesivo (per evitare che si secchi rapidamente). Contemporaneamente alle soluzioni di prova viene fornito come controllo un campione con un liquido di controllo del test o una soluzione fisiologica. La soluzione della sostanza in esame viene selezionata in modo tale da non provocare irritazione alla pelle in una persona sana. Se si avverte prurito o sensazione di bruciore nel sito del test, il paziente deve rimuovere l'adesivo e la garza e rimuovere la sostanza in esame rimanente dalla superficie della pelle con alcol o etere. Il materiale testato viene mantenuto sulla pelle per non più di 5 giorni. Il risultato dell'applicazione K. p viene valutato dopo 20 minuti, 12 ore, 1, 3 e 7 giorni. dopo aver rimosso la sostanza (colore fig. 1-3). La specificità dell'applicazione degli articoli K. è molto elevata se vengono seguite tutte le regole tecniche per la loro applicazione, ovvero la concentrazione dell'allergene è selezionata correttamente, vengono presi in considerazione gli indicatori del campione di controllo, ecc. La loro specificità è simile a quella specificità degli elementi di scarificazione K. ed è molto più elevata rispetto a quella intradermica. La sicurezza è significativamente più elevata rispetto ai test intradermici, poiché gli strati superficiali delle cellule della pelle impediscono la rapida penetrazione dell'allergene nel corpo. Se la reazione è rapida, l'allergene viene rimosso. In caso di reazione tardiva, l'allergene viene rimosso anche non appena compaiono i sintomi di irritazione cutanea. L'assunzione di antistaminici non influisce sui risultati del test; i farmaci corticosteroidi, al contrario, riducono significativamente l'intensità della reazione.

Prove di scarificazione introdotti in pratica da E. Schloss nel 1912. Sono meno sensibili dei test intradermici, ma più specifici e sicuri. I test di scarificazione vengono eseguiti sulla pelle della superficie anteriore dell'avambraccio. Vengono utilizzati allergeni pollinici contenenti 1.000 e 10.000 PNU (unità di azoto proteico) e allergeni domestici ed epidermici contenenti 5.000-10.000 PNU. Se l'estratto allergenico contiene 20.000 PNU, viene diluito con un liquido di controllo del test. Gocce di allergeni sterili vengono applicate sulla pelle pretrattata e asciugata con alcol al 70% a una distanza di 3-4 cm l'una dall'altra. Gli allergeni vengono aspirati dalle bottiglie attraverso tappi di gomma utilizzando un ago da siringa (per ciascun allergene viene utilizzata una siringa separata). Quindi, attraverso ciascuna goccia di allergene, vengono realizzati due graffi paralleli, ciascuno lungo 0,5 cm, con un ago o uno scarificatore separato per non danneggiare i vasi sanguigni. Quando si utilizzano allergeni in polvere, si applicano prima gocce di liquido di controllo del test sulla pelle, quindi con un ago sterile asciutto (un ago separato per ciascun allergene), si prelevano piccole quantità di allergene (sulla punta dell'ago), si aggiungono ad una goccia di liquido di controllo del test e la scarificazione viene eseguita con lo stesso ago. Come controllo negativo è necessario utilizzare un liquido di controllo del test e come controllo positivo una soluzione di istamina con una diluizione di 1: 10.000. Non eseguire più di 20 test contemporaneamente. I risultati dei test di scarificazione vengono valutati dopo 20 minuti. (colore fig. 4-5).

Prova di iniezioneè una modifica della scarificazione K. p., con questo test la possibilità di danni ai vasi sanguigni è inferiore rispetto alla scarificazione. Lo eseguono con gli stessi allergeni. Per il test di iniezione, viene prelevata una soluzione più concentrata dell'allergene rispetto a quando si esegue una procedura di scarificazione, poiché una quantità minima di allergene penetra nella pelle. La tecnica del test di iniezione presenta varie modifiche. Il test classico si svolge come segue. Una goccia dell'allergene da testare viene applicata sulla pelle precedentemente disinfettata e l'epidermide della pelle viene perforata con un ago attraverso la goccia. La valutazione del test mediante iniezione viene effettuata allo stesso modo del prick test. Solo dopo aver ricevuto risultati negativi da questo test o da un graffio test con allergeni non batterici si procede ai test intradermici.

Test intradermici vengono utilizzati principalmente per rilevare la sensibilizzazione ad allergeni di origine batterica o fungina. Per la diagnosi delle malattie allergiche furono proposti per la prima volta da R. Cook nel 1911. I test intradermici forniscono un aiuto significativo nella diagnosi della tubercolosi (reazione di Mantoux), della brucellosi (reazione di Burnet), dell'echinococcosi (reazione di Casoni), ecc. Il test intradermico di Mantoux La reazione completa il test di Pirquet.

Quando l'allergene viene somministrato per via intradermica, fornisce un contatto più stretto con le cellule della pelle che con la scarificazione. Pertanto, i test intradermici sono circa 100 volte più sensibili, ma meno specifici, dei prick test. Possono causare complicazioni allergiche locali e generali. Per i test intradermici vengono utilizzate siringhe con graduazioni da 0,01 ml e aghi sottili con smusso corto e punta non smussata. Per ciascun allergene sono necessari una siringa e un ago separati. La pelle della superficie anteriore dell'avambraccio viene prima trattata con alcol al 70%. L'iniezione viene eseguita come segue: la punta di un ago, posizionata su una siringa con una piccola quantità di allergene da testare, viene inserita con un angolo molto piccolo nello strato superficiale dell'epidermide con l'ago tagliato verso l'alto in modo che l'ago il foro viene completamente nascosto nell'epidermide (Fig.), dopodiché la quantità necessaria di allergene viene iniettata per via intradermica. Più l'iniezione è superficiale, maggiore è la sensibilità della pelle. La reazione allo stesso allergene quando somministrato per via sottocutanea sarà molto debole e quando somministrata per via intramuscolare sarà negativa. Con la tecnica di iniezione corretta, subito dopo l'iniezione si forma un infiltrato sulla superficie cutanea. Quando si testano gli allergeni non infettivi, vengono somministrati per via intradermica in una quantità di 0,01-0,02 ml di estratto. Gli allergeni batterici vengono somministrati in grandi quantità - da 0,05 a 0,1 ml. È obbligatorio eseguire test paralleli con il fluido di controllo del test. Allo stesso tempo, non puoi eseguire più di 10 test intradermici con allergeni di diversi gruppi. Per le reazioni negative e deboli vengono eseguiti altri 10 test. Il risultato del test viene visualizzato dopo 15-20 minuti. e dopo 24 e 48 ore. (colore fig. 6-12).

Prove a freddo e termiche. Per la diagnostica, il cosiddetto Per le allergie fisiche vengono utilizzati test del freddo e del caldo. Durante un test a freddo, un pezzo di ghiaccio di 2-3 cm di diametro viene fissato sulla pelle della superficie palmare dell'avambraccio per 3 minuti. oppure una provetta riempita d'acqua con pezzi di ghiaccio per 10 minuti. Con una reazione positiva (con orticaria da contatto fredda), sulla pelle si forma una vescica orticarioide, solitamente senza "pseudopodia", e la sua forma corrisponde al contorno di un pezzo di ghiaccio o di una provetta. Il test termico viene eseguito come segue. Una provetta con acqua riscaldata ad una temperatura di 40-42° viene posta sulla pelle della superficie anteriore dell'avambraccio per 10 minuti. Un test positivo è caratterizzato dalla formazione di una vescica orticarioide nel punto di contatto. K. p. per le allergie fisiche non identificano un allergene specifico, ma permettono solo di stabilire se il paziente ha una maggiore sensibilità al fattore temperatura.

Valutazione del test cutaneo

Nel valutare gli elementi K. (tabella), è necessario tenere conto del fatto che la loro specificità non è assoluta. In alcuni casi, possono essere positivi, ma non correlati all'eziologia della malattia. Tali reazioni sono chiamate falsi positivi. Le cause delle reazioni false positive possono essere: 1. Aumento della sensibilità dei capillari cutanei all'irritazione meccanica. In questo caso, tutti i campioni, incluso un campione con un liquido di controllo del test, presentano rigonfiamenti e non possono essere considerati positivi. A volte questa reazione può essere alleviata prescrivendo antistaminici. 2. Utilizzo di aghi smussati o troppo spessi o applicazione di scarificazioni troppo profonde. 3. Effetto irritante aspecifico dell'allergene dovuto alla sua preparazione impropria (l'allergene deve essere isotonico e avere una reazione neutra). 4. Introduzione di una quantità eccessiva di allergene (durante il test intradermico). 5. Contaminazione degli strumenti (siringhe, aghi) con allergeni rimasti da test precedenti o da soluzioni di istamina. 6. Ipersensibilità ai conservanti utilizzati per preparare gli allergeni (mertiolato, fenolo, glicerina). 7. Immunol stretto, somiglianza tra alcuni allergeni dovuta alla presenza di gruppi antigenici comuni.

Se l'anamnesi contiene chiare indicazioni sull'etiolo, sul significato di un determinato allergene e K. p fornisce con esso risultati negativi, tali risposte sono chiamate false negative. Le ragioni delle reazioni false negative possono essere le seguenti: 1) perdita delle proprietà allergeniche degli estratti a causa di una conservazione a lungo termine e impropria o durante il processo di produzione (gli allergeni alimentari vengono inattivati ​​particolarmente rapidamente); 2) assenza o diminuzione della sensibilità del paziente, causata da: a) deplezione di anticorpi durante o dopo una grave esacerbazione della malattia, b) assenza di anticorpi sensibilizzanti la pelle in alcuni tipi di allergie, ad esempio allergie alimentari ( vedi), c) diminuzione della reattività cutanea associata a disturbi circolatori, edema, disidratazione, influenza delle radiazioni ultraviolette, con cachessia generale e vecchiaia, d) il paziente ha assunto antistaminici, adrenalina ed efedrina poco prima del test.

Tavolo. INTENSITÀ DELLA REAZIONE DELLA PELLE DURANTE ALCUNE TECNICHE DI TEST SULLA PELLE (La tabella è illustrata con disegni a colori)

Bibliografia: Adrianova N.V. e Titova S.M. Ufficio allergologico, p. 11, M., 1970; Malattie allergiche nei bambini, ed. M. Ya Studenikin e T. S. Sokolova, p. 78, M.,’1971; Allergologia pratica moderna, ed. A. D. Ado e A. A. Polner, p. 23, M., 1963; Sherman W.V.

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I test cutanei, essendo uno dei principali metodi di diagnosi specifica, non possono sempre essere utilizzati. Le seguenti sono controindicazioni al loro utilizzo:
- 1. Periodo di inasprimento di una malattia allergica;
- 2. Malattie acute intercorrenti (ARVI, bronchite, ecc.). In entrambi i casi è possibile effettuare un test cutaneo 3-4 settimane dopo il sollievo;
- 3. Malattie scompensate e sottocompensate del sistema cardiovascolare, fegato e reni, sistema endocrino;
- 4. Reumatismi in periodi acuti e subacuti;
- 5. Processo di tubercolosi nella fase acuta. Per gli ultimi tre gruppi di patologie il test cutaneo può essere eseguito dopo 6 mesi di remissione clinica e laboratoristica;
- 6. Malattie ematiche maligne e malattie tumorali;
- 7. Malattie mentali e neurologiche. Negli ultimi due gruppi di malattie i test cutanei sono assolutamente controindicati;
- 8. Trattamento a lungo termine con ormoni corticosteroidi. Il test cutaneo è possibile non prima di 3 mesi dopo la loro interruzione;
- 9. Storia precedente di shock anafilattico (una controindicazione assoluta per il test cutaneo);
- 10. Il periodo in cui il paziente assume antistaminici, anti-liberatori (ketotifen, zaditen, intal), xantine, agonisti adrenergici, che possono sopprimere la reazione allergica cutanea. Questi farmaci devono essere interrotti 3-5 giorni prima del test cutaneo.

La sottovalutazione delle controindicazioni e il mancato rispetto delle regole fondamentali per l'esecuzione dei test cutanei può portare a complicazioni o risultati poco chiari (falsi positivi, falsi negativi), che possono portare ad una diagnosi eziologica errata e ad una terapia inadeguata.

Le cause dei risultati falsi positivi possono includere un'alterata reattività cutanea; aumento della sensibilità della pelle alle irritazioni meccaniche; aumento della sensibilità del paziente al fenolo, che fa parte delle soluzioni allergeniche e del liquido di controllo del test (in tutti questi casi si nota un risultato positivo dei test cutanei con tutti gli allergeni e il liquido di diluizione); contaminazione delle siringhe con allergeni rimasti da test precedenti (pertanto, gli strumenti devono essere trattati secondo le istruzioni ed è necessaria la loro marcatura); aumento individuale della distruzione spontanea dei mastociti; la presenza di reazioni crociate con allergeni correlati, ad esempio tra polline o tra polline e cibo.

Le ragioni dei risultati falsi negativi sono la ridotta reattività cutanea (come evidenziato da un test dell'istamina negativo); condurre test mentre i pazienti assumono antistaminici, anti-liberatori, adrenomimetici e ormoni glucocorticoidi; violazione della tecnica (somministrazione sottocutanea dell'allergene anziché intradermica, profondità di scarificazione insufficiente); mancanza di anticorpi nella pelle (questo è particolarmente frequente nei bambini del primo anno di vita, poiché le loro reazioni sono debolmente fissate nella pelle); assenza dell'allergene “colpevole” nel kit utilizzato per i test cutanei.

Se sussistono controindicazioni al test cutaneo o se si ottengono risultati falsi positivi e falsi negativi, è possibile utilizzare un test cutaneo indiretto: la reazione di trasferimento passivo di ipersensibilità (RPH) di Prausnitz-Küstner, che consente di identificare potenziali allergeni senza rischi per la pelle. paziente.

Il PKK viene effettuato sulla pelle di una persona sana, il ricevente. La reazione si basa sul rilevamento degli anticorpi reagina nel siero del paziente che, una volta iniettati nella pelle del ricevente, si fissano sui mastociti del derma e, con la successiva introduzione dell'allergene corrispondente in quest'area, il sistema immunitario risultante complesso provoca la formazione di una vescica e iperemia dovuta al rilascio di istamina dai mastociti. La reazione cutanea viene valutata in base alla loro dimensione.

Le indicazioni per l'RPC sono: 1) tutte le condizioni dei pazienti in cui il test cutaneo diretto è controindicato; 2) risultati poco chiari dei test cutanei, loro discrepanza con i dati dell'anamnesi; 3) diagnosi differenziale dei risultati dei test cutanei subclinici e falsi positivi; 4) risultato falso negativo dei test cutanei diretti.

Con la scoperta delle reagine come IgE, è diventato possibile rilevare la sensibilizzazione utilizzando metodi in vitro. La diagnosi clinica delle malattie atopiche è consentita solo in laboratori specializzati. Di un certo valore sono i test cutanei effettuati sia nei pazienti esaminati che nei soggetti passivamente sensibilizzati. Per la prima volta, una reazione allergica locale fu riprodotta da Blackley nel 1873 sulla congiuntiva e sulla pelle di un paziente sensibilizzato al polline. I test allergici si basano sul fatto che applicando basse dosi di un allergene è possibile indurre una reazione antigene-anticorpo. I test sugli allergeni possono essere riprodotti sugli organi d'urto, in particolare nella rinite allergica - sulla mucosa nasale, nell'asma bronchiale - sui bronchi. Tuttavia, questi metodi richiedono molto lavoro e non sono sempre sicuri. I più accessibili sono i test cutanei e i test delle mucose. Questi ultimi sono considerati test provocatori, poiché imitano il percorso naturale di penetrazione dell'allergene nel corpo.

Test cutanei. La loro impostazione si basa sul fatto che nei pazienti con atopia, nonostante l'elevata produzione di reagine sulle mucose e nel tessuto linfoide delle vie respiratorie e gastrointestinali, una parte significativa degli anticorpi entra in circolazione. Ciò determina lo stato di sensibilizzazione di altri organi e tessuti. Lo scopo dello studio è indurre una reazione antigene-anticorpo attraverso l'applicazione locale di una bassa dose di allergene senza il rischio di disturbi funzionali nel corpo o lo sviluppo di una reazione generale. I vantaggi di questo metodo includono la possibilità di somministrazione simultanea di una quantità significativa di allergeni.

A seconda del tipo di applicazione dell'allergene, esistono diversi test: prick test e scratch test, intracutaneo e intracutaneo.

Test cutaneo con puntura- Questo è il metodo di scelta durante l'esame iniziale del paziente. Una goccia della soluzione allergenica viene aggiunta all'area pretrattata con un antisettico (lato palmo dell'avambraccio, schiena). La puntura viene eseguita con una lancetta, un ago o una cannula. Per facilitare il processo di assorbimento dell'allergene, viene utilizzata una modifica del test: dopo l'iniezione, la pelle viene sollevata e vengono praticate leggere incisioni nel sito di iniezione. La puntura deve essere superficiale per non causare sanguinamento. La distanza tra le aree reattive è di almeno 4 cm. Dopo ogni test, lo strumento deve essere cambiato o sterilizzato accuratamente per evitare una reazione falsa positiva. Le soluzioni utilizzate per preparare gli estratti servono come controlli (la reazione dovrebbe essere negativa) e come soluzione di istamina appena preparata per valutare la reattività cutanea.

I risultati vengono presi in considerazione dopo 20 minuti. Il criterio di valutazione è il diametro medio della vescica e della zona eritematosa.

Prova di scarificazione. Utilizzando una lancetta, vengono praticate delle incisioni lunghe circa 0,5 cm sulla superficie della pelle. L'allergene viene introdotto e massaggiato leggermente in queste aree con una certa precauzione (cercando di non causare sanguinamento). La contabilizzazione della reazione è simile a quella sopra. È importante tenere presente che con la scarificazione sono inevitabili vari gradi di danno alla pelle, quindi il processo di assorbimento degli allergeni è difficile da controllare.

Entrambi i campioni presentano numerosi vantaggi. Quindi non richiedono spese particolari, sono relativamente sicuri e indolori. Ciò è particolarmente importante quando si somministrano test ai bambini piccoli.

Test della finestra cutanea- Questa è in realtà una modifica del test di scarificazione. Vengono praticate delle incisioni sulla superficie della pelle, l'allergene viene aggiunto e coperto con un coprioggetto. Dopo 24 ore, il vetrino viene rimosso e colorato per identificare le cellule migranti. Un indicatore di una reazione allergica è l'eosinofilia superiore al 5%. Gli svantaggi del test includono il fatto che i suoi risultati non sono sempre riproducibili.

Test intradermico serve come metodo di esame primario se non vi è indicazione di un elevato grado di sensibilizzazione. Il test viene solitamente eseguito sulla spalla o sulla schiena del paziente. La pelle viene trattata con alcool e quindi circa 0,2 ml di estratto allergenico vengono iniettati rigorosamente per via intradermica. A questo scopo è conveniente utilizzare le cannule n. 18 o 20. A causa dell'elevata sensibilità della pelle, in alcuni pazienti non è possibile determinare la dose esatta dell'allergene. Inoltre, l'uso di dosi elevate di allergene è associato a traumi per il paziente. Come controlli servono: una soluzione per la preparazione dell'estratto (reazione negativa) e una soluzione di istamina appena preparata. Dopo soli 20 minuti è possibile tenere conto dei risultati della reazione. Un test positivo è accompagnato dalla formazione di una vescica con una zona di iperemia lungo la periferia. Una reazione positiva con controllo negativo è la formazione di una vescica e di una zona di iperemia con diametro rispettivamente di 7 e 15 mm. Un'analisi comparativa del diametro delle manifestazioni cutanee e delle concentrazioni di allergeni o istamina ha rivelato un certo schema.

Risultati dei test cutanei e loro interpretazione.

1. Reazioni locali. a) La reazione precoce avviene dopo 10 minuti e raggiunge il massimo dopo 20-30 minuti (diametro della vescica 1 mm, zona eritematosa - 15 mm). b) Ad una maggiore concentrazione di antigene si osserva spesso una reazione di tipo ritardato (con raffreddore da fieno, sensibilizzazione causata dal pelo degli animali). In alcuni dei soggetti esaminati è causata dalla produzione di precipitine. È stato dimostrato che gli anticorpi IgE possono provocare una reazione di tipo ritardato con formazione di eritema e gonfiore dopo 4-12 ore, accompagnati da prurito e talvolta dolore. L'analisi istologica rivela infiltrazione di eosinofili, neutrofili e cellule mononucleate insieme ad edema. Con ogni probabilità giocano un ruolo fattori come la callicreina e la FCN-A.

2. Reazioni generali. I pazienti spesso manifestano reazioni focali accompagnate da sintomi della malattia di base. Ciò è facilitato dal fatto che gli organi d'urto vengono preparati per una risposta immunitaria. Questa reazione è certamente indesiderabile. D'altro canto, la sua manifestazione può essere considerata una prova del significato patogenetico di questa sensibilizzazione.

Forme gravi di complicanze si osservano principalmente con un alto grado di sensibilizzazione. Il più pericoloso è lo shock anafilattico.

Scelta dell'allergene. In linea di principio, ci sono tre possibili opzioni di test cutaneo:

- “Test di conferma” (vengono somministrati quegli allergeni che si ritiene abbiano significato patogenetico). In questo caso, il medico fa affidamento sulla storia medica.

Il test di “ricerca” viene prescritto ai pazienti che non hanno nella loro anamnesi dati che richiedano conferma o revisione. Tuttavia, la scelta degli allergeni non è limitata.

Determinazione del grado di sensibilizzazione. Viene eseguita la cosiddetta titolazione cutanea, cioè viene introdotta una certa quantità di allergene per selezionare la dose utilizzata nel test provocatorio o la dose iniziale durante la desensibilizzazione, nonché per controllare quest'ultima. Questi test indicatori sono importanti per selezionare l'estratto e il dosaggio appropriati dell'allergene. Le reazioni non coinvolgono sostanze con le quali il paziente non è stato in contatto. È possibile utilizzare miscele di estratti. Ecco perché il test allergenico dovrebbe essere eseguito da un medico che conosca bene la storia e la natura della malattia.

Diamo un'occhiata ai gruppi più comuni di allergeni.

A) Polline: graminacee (coda di volpe, blatta, rosmarino, ctenoforo, erba di grano, ortica, festuca, piantaggine, acetosa, segale perenne); fiori (margherita, fireweed, papavero, tulipano, verga d'oro, chistyak, dente di leone, cuore di prato, ranuncolo); cereali (segale); arbusti (rosa canina, sambuco, rosa canina, lillà, nocciola); alberi (betulla, tiglio, acacia bianca, salice, pino, ontano, castagno, ciliegio).

B) Elementi dell'epidermide degli animali e dell'uomo: forfora (coniglio, gatto, cane, montone, toro, capra, maiale, cavallo); piume (oca, anatra e pollo); forfora umana.

B) Polvere domestica.

D) Zecche.

E) Muffe: Penicillium, Aspergillus, Mucor, Cladosporium, Hormodendrum, Alternaria.

E) Alimentazione: pesci d'acqua dolce (trote, lucci, carpe, tinche, lucioperca); specie ittiche marine e oceaniche (merluzzo, ruffa, aringa, sgombro); carne (maiale, manzo, agnello, cavallo, capra, pollame); latte (mucca e capra, fresco e bollito), uova (albume e tuorlo); cereali (farina e crusca di frumento, segale, orzo, avena, mais); frutta e legumi.

I seguenti fattori non specifici influenzano i risultati delle reazioni del test:

1. Rifornimento di sangue locale. Durante la stagione fredda, il paziente può manifestare disturbi vascolari; in questi casi è necessario riportare la temperatura cutanea alla normalità (a tale scopo, la pelle viene pulita con alcool o etere). Una conseguenza indesiderabile del test cutaneo è una reazione pronunciata sotto forma di iperemia.

2. Sito di introduzione dell'allergene. Si nota che le reazioni provocate sulla schiena sono più pronunciate che sulla spalla. Tuttavia, non ne consegue che la reazione sulla spalla possa essere un falso negativo. I risultati possono essere influenzati dalle condizioni atmosferiche, dall'esposizione ai raggi ultravioletti e ai raggi X.

3. Contatto naturale con l'allergene. Immediatamente dopo le reazioni causate da dosi massicce di allergene, si osserva una leggera diminuzione dei livelli anticorpali. Anche l'eliminazione a lungo termine dell'allergene (più di 1 anno) dà questo effetto. In confronto, l’esposizione prolungata ad un allergene, come durante la stagione della fioritura dell’erba, può portare ad un aumento della reazione.

4. Medicinali. Gli antistaminici in dosi appropriate possono sopprimere la reazione del test, quindi dovrebbero essere interrotti 2-7 giorni e i derivati ​​dell'adrenalina - un giorno prima del test cutaneo. L'isoprenalina somministrata per inalazione non ha effetti significativi. Anche l'effetto dell'aminofillina è debole. I corticosteroidi e l'ACTH a dosi terapeutiche hanno scarso effetto sulla risposta immediata. Solo alte dosi di corticosteroidi o corticosteroidi topici possono ridurre la reazione. È stata osservata la soppressione della fase ritardata (tardiva) della reazione da parte dei corticoidi.

5. Età. Un'analisi comparativa ha mostrato che le reazioni cutanee nei bambini piccoli sono meno pronunciate che negli adulti. Ciò non è dovuto solo alle basse concentrazioni di reagina. È stato stabilito che con la sensibilizzazione cutanea passiva con lo stesso siero, la gravità delle reazioni nei bambini è molto inferiore. Un basso livello di sensibilizzazione è stato riscontrato anche nei bambini durante il 1° anno di vita. Di norma, non ci sono differenze tra i gruppi di persone giovani e di mezza età. Solo alcuni pazienti di età superiore ai 50 anni riscontrano una diminuzione della risposta all'allergene e, contemporaneamente, della concentrazione di IgE specifiche.

6. I bioritmi giornalieri possono anche influenzare le prestazioni del test cutaneo (sono state notate fluttuazioni della risposta entro il 5-71% del livello medio). Le deviazioni minime si osservano intorno alle 11.00, le massime alle 23.00. Si ritiene che questo fenomeno sia associato alla produzione di ormoni, in particolare di 17-idrossicorticosteroidi.

Se escludiamo tutti i possibili errori del metodo, i risultati positivi dei test cutanei dimostrano il fatto della sensibilizzazione, specifica in senso immunologico. Tuttavia, non sempre possono confermare la diagnosi della malattia. Anche una reazione negativa non esclude la possibilità di sensibilizzazione. Inoltre, in base alla gravità della reazione, è impossibile trarre una conclusione sul significato patogenetico dei risultati di questo test.

Una reazione falsa negativa può essere causata dai seguenti errori:

Superamento della durata di conservazione degli estratti che hanno perso l'attività allergenica;

Assenza di un allergene specifico (questo è particolarmente vero se si sospetta un'allergia alla polvere domestica);

Un metodo non fisiologico per introdurre un allergene (un certo numero di allergeni entrano nel corpo con cibo e farmaci, in caso di reazione negativa, viene prescritto un test provocatorio);

Primi stadi di sensibilizzazione (manifestazioni cliniche di allergia sono possibili già nelle prime fasi della malattia, poiché le reagine sintetizzate si legano rapidamente alla superficie cellulare; tuttavia, la concentrazione di queste ultime potrebbe non essere sufficientemente elevata da provocare una reazione positiva);

Ridotta capacità di risposta immunitaria associata all'assunzione di farmaci, all'età del paziente, ecc. In questi casi anche gli indicatori del test di controllo con istamina sono ridotti.

Una reazione falsa positiva può essere causata dai seguenti motivi:

Effetto irritante degli allergeni (sulla base dei risultati dei test cutanei su individui sani, sono state selezionate e raccomandate dosi individuali ottimali di allergeni);

Aumento della sensibilità cutanea (irritazione meccanica, orticaria, reazione di controllo positivo).

L'analisi dei dati anamnestici e dei risultati dei test cutanei ha rivelato i seguenti modelli:

1) Se il test cutaneo è positivo e l'allergene è noto, il fatto della sensibilizzazione è fuori dubbio.

2) Se la reazione è negativa e l'allergene non viene identificato, è improbabile che l'allergene in questione causi la malattia.

3) Se con un test positivo non ci sono informazioni sull'allergene, è necessario rivedere i dati dell'anamnesi e accertarsi anche del vero motivo dei risultati della reazione positiva. Esiste una condizione nota denominata “sensibilizzazione latente”. Inoltre, dopo la guarigione clinica, i pazienti spesso mantengono un test cutaneo positivo per un lungo periodo. In alcuni casi viene rilevata una “sensibilizzazione subclinica”. Dovrebbero essere prese in considerazione queste possibili ragioni per un test positivo.

Complicazioni con i test cutanei. Il pericolo principale sorge quando si applicano dosi elevate di allergene: è molto probabile lo sviluppo di reazioni tardive e generali. Insieme alla minaccia di esacerbazione delle condizioni del paziente, possono comparire tutti i sintomi delle condizioni allergiche, incluso lo shock anafilattico.

Un test provocatorio è un metodo affidabile per testare un allergene, in cui i sintomi caratteristici sono causati dall'applicazione della sostanza sospetta in modo fisiologico. Diverse versioni del test devono soddisfare due requisiti: 1 - se possibile, l'allergene testato deve essere somministrato in dosi diverse all'organo corrispondente, 2 - la valutazione della reazione antigene-anticorpo deve essere obiettiva.

La condizione per l'esecuzione del test è l'assenza di contatto naturale con l'allergene, altrimenti ciò complicherebbe notevolmente l'interpretazione dei risultati. È consigliabile che il paziente non sappia quale allergene gli viene somministrato (metodo “cieco”). Il controllo è un test che utilizza una soluzione per preparare l'estratto (placebo).

Un test per escludere il sospetto allergene responsabile della reazione atopica. Solitamente basato su dati anamnestici. Questo test viene utilizzato per diagnosticare gli stadi avanzati della malattia per determinare le possibilità di recupero del paziente.