Методы изучения липидного обмена. Лабораторные показатели обмена липидов

III. ДАННЫЕ ЛАБОРАТОРНЫХ И ИНСТРУМЕНТАЛЬНЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

IV. Отбор проб пищевых продуктов для санитарно - бактериологического исследования.

Исследования обмена липидов и липопротеинов (ЛП), холестерина (ХС), в отличие от других диагностических тестов, имеют социальное значение, так как требуют неотложных мероприятий по профилактике сердечно-сосудистых заболеваний. Проблема коронарного атеросклероза показала четкую клиническую значимость каждого биохимического показателя как фактора риска ишемической болезни сердца (ИБС), и в последнее десятилетие изменились подходы к оценке нарушений липидного и липопротеинового обмена.

Риск развития атеросклеротического поражения сосудов оценивают по следующим биохимическим тестам:

Определение отношений ОХС/ХС-ЛПВП, ХС-ЛПНП/ХС-ЛПВП.

Триглицериды

ТГ - нейтральные нерастворимые липиды, поступающие в плазму из кишечника или из печени.

В тонком кишечнике ТГ синтезируются из экзогенных, поступивших с пищей жирных кислот, глицерола и моноацилглицеролов. Образованные ТГ первоначально поступают в лимфатические сосуды, затем в виде хиломикронов (ХМ) через грудной лимфатический проток поступают в кровоток. Время жизни ХМ в плазме невелико, они поступают к жировым депо организма.

Наличием ХМ объясняется белесый цвет плазмы после приема жирной пищи. ХМ быстро освобождаются от ТГ при участии липопротеинлипазы (ЛПЛ), оставляя их в жировых тканях. В норме после 12-часового голодания ХМ не определяются в плазме. В связи с низким содержанием белка и высоким количеством ТГ ХМ при всех видах электрофореза остаются на линии старта.

Наряду с поступающими с пищей ТГ в печени из эндогенно синтезированных жирных кислот и трифосфоглицерола, источником которого является обмен углеводов, образуются эндогенные ТГ. Эти ТГ транспортируются кровью к жировым депо организма в составе липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП). ЛПОНП являются главной транспортной формой эндогенных ТГ. Содержание ЛПОНП в крови коррелирует с подъемом уровня ТГ. При высоком содержании ЛПОНП плазма крови выглядит мутной.

Для исследования ТГ используется сыворотка крови или плазма крови после 12-часового голодания. Хранение образцов возможно в течение 5-7 дней при температуре 4 °С, не допускается повторное замораживание и оттаивание проб.

Холестерин

ХС синтезируется во всех клетках организма, однако основная его масса образуется в печени и поступает с пищей. В сутки организм синтезирует до 1 г ХС.

ХС - гидрофобное соединение, основной формой транспорта которого в крови являются белок-липидные мицеллярные комплексы ЛП. Их поверхностный слой образуют гидрофильные головки фосфолипидов, аполипопротеинов, ХС эстерифицированный более гидрофилен, чем ХС, поэтому эфиры ХС с поверхности перемещаются в центр липопротеиновой мицеллы.

Основная часть ХС транспортируется кровью в виде ЛПНП от печени к периферическим тканям. Аполипопротеином ЛПНП является апо-В. ЛПНП взаимодействуют с апо-В-рецепторами плазматических мембран клеток, захватываются ими путем эндоцитоза. Освобождающийся в клетках ХС используется для построения мембран и эстерифицируется. ХС с поверхности клеточных мембран вступает в мицеллярный комплекс, состоящий из фосфолипидов, апо-А, и образует ЛПВП. ХС в составе ЛПВП подвергается эстерификации под действием лецитинхолестеролацил-трансферазы (ЛХАТ) и поступает в печень. В печени поступивший в составе ЛПВП ХС подвергается микросомальному гидроксилированию, превращается в желчные кислоты. Выделение его происходит как в составе желчи, так и в виде свободного ХС или его эфиров.

Исследование уровня ХС не дает диагностической информации об определенном заболевании, а характеризует патологию обмена липидов и ЛП. Наиболее высокие цифры ХС имеют место при генетических нарушениях обмена ЛП: семейная гомо- и гетерозиготная гиперхолестеринемия, семейная комбинированная гиперлипидемия, полигенная гиперхолестеринемия. При ряде заболеваний развивается вторичная гиперхолестеринемия: нефротический синдром, сахарный диабет, гипотиреоз, алкоголизм.

Для оценки состояния липидного и ЛП обмена определяют величины ОХС, ТГ, ХС ЛПВП, ХС ЛПОНП, ХС ЛПНП.

Определение этих величин позволяет рассчитать коэффициент атерогенности (Ка):

Ка = ОХС – ХС ЛПВП / ХС ЛПОНП,

И другие показатели. Для расчетов необходимо также знание следующих пропорций:

ХС ЛПОНП = ТГ (ммоль/л) /2,18; ХС ЛПНП = ОХС – (ХС ЛПВП + ХС ЛПОНП).

Увеличение концентрации ХС наблюдается при полигенной гиперлипопротеидемии типа II А и II Б, III, гиперлипопротеидемии I, IV, V типов, вторичной, приобретенной гиперлипопротеидемии, отмечается также при заболеваниях печени, внутри- и внепеченочном холестазе, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, ХПН, злокачественных опухолях поджелудочной железы, простаты, гипотиреозе, подагре, ИБС, беременности, диабете, алкоголизме, анальбуминемии, дисглобулинемии, острой перемежающейся порфирии. Снижение концентрации холестерина обнаружено …

Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП. Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9—1,9 ммоль/л. Принцип метода Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) …

ТГ — нейтральные нерастворимые липиды, поступающие в плазму из кишечника или из печени. В тонком кишечнике ТГ синтезируются из экзогенных, поступивших с пищей жирных кислот, глицерола и моноацилглицеролов. Образованные ТГ первоначально поступают в лимфатические сосуды, затем в виде хиломикронов (ХМ) через грудной лимфатический проток поступают в кровоток. Время жизни ХМ в плазме невелико, они поступают …

ХС является составной частью всех клеток организма. Он входит в состав клеточных мембран, ЛП, является предшественником стероидных гормонов (минерало- и глюкокортикоидов, андрогенов и эстрогенов). ХС синтезируется во всех клетках организма, однако основная его масса образуется в печени и поступает с пищей. В сутки организм синтезирует до 1 г ХС. ХС — гидрофобное соединение, основной формой …

В отечественных лабораториях уровень ТГ чаще всего определяют с помощью химических методов по уровню глицерина, образующегося при гидролизе. Это может приводить к получению завышенных результатов, так как повышение уровня глицерина в крови вызывают: некачественное взятие крови (выброс адреналина во время стресса), физические упражнения, состояния, сопровождающиеся метаболическим стрессом. Наиболее предпочтительными являются ферментные методы исследования содержания ТГ …

Принцип метода Триглицериды гидролизуются с освобождением глицерина, который окисляется перйодатом натрия до формальдегида. Образующиеся при этом йодаты и непрореагировавшие перйодаты восстанавливаются избытком бисульфита натрия, после чего формальдегид определяют по цветной реакции с хромотроповой кислотой. Ферментативный метод определения содержания триглицеридов в сыворотке крови Триглицериды ферментативно гидролизуются до глицерола в соответствии со следующей схемой реакции: Триглицериды ↔ …

Методы определения общего холестерина подразделяются на: колориметрические. Насчитывается около 150 колориметрических методов, основывающихся на реакциях образования цветных комплексов; нефелометрические методы, основанные на сравнении степени мутности стандартного и исследуемого раствора; титрометрические методы; флюориметрические методы, позволяющие определять холестерин в микрообъемах сыворотки крови (например, в 0,01 мл ее); газохроматографические и хроматографические методы; гравиметрические методы.

Необходимые реактивы I. Ледяная уксусная кислота. II. Концентрированная серная кислота. III. Уксусный ангидрид. IV. Абсолютный этиловый спирт. V. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты. Смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. Хранить в …

Ход определения К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без признаков гемолиза, перемешивают встряхиванием и ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при температуре 37 °С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против реактива при длине волны 625 нм. Построение калибровочной …

Липиды участвуют в строительстве клеточной стенки, образовании желчи, многих гормонов (мужские и женские половые гормоны, кортикостероиды) и витамина Д. Жирные кислоты - это источник энергии для органов и тканей.

Все жиры в организме человека делятся на 3 категории:
1. триглицериды или нейтральные жиры;
2. общий холестерин и его фракции;
3. фосфолипиды.

В крови липиды находятся в виде следующих соединений:
1. хиломикроны - содержат в основном триглицериды;
2. липопротеиды высокой плотности (ЛПВП) - имеют в своем составе 50% белка, 30% фосфолипидов и 20% холестерина;
3. липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) - содержат 20% белка, 20% фосфолипидов, 10% триглицеридов и 50% холестерина;
4. липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП) - образуются при распаде ЛПНП, включают в себя большое количество холестерина.

Наибольшее клиническое значение в анализе имеет общий холестерин, ЛПНП, ЛПВН и триглицериды. При заборе крови следует помнить, что нарушение правил подготовки и употребление жирной пищи может привести к значительным погрешностям в результатах анализа.

ХОЛЕСТЕРИН

Холестерин — является жироподобным веществом, из которого в основном формируются атеросклеротические бляшки, повинные в развитии атеросклероза, опаснейшей болезни артерий человека. Холестерин, в переводе с греческого — твердая желчь. Это вещество относится к классу липидов, и возможно, многим покажется странным, но только 20% его человек получает из продуктов питания, в частности, с животными жирами, мясом, некоторыми видами белков, и другими продуктами. А остальные 80% холестерина вырабатывается в печени человека.

Холестерин - важный строительный элемент для клеток нашего организма. Он участвует в обмене веществ на клеточном уровне, входя в состав клеточных мембран. Важен он и для выработки важнейших половых гормонов, таких как тестостерон, эстрогены, и кортизол. В чистом виде, холестерина в организме не много, в основном он присутствует в составе особых соединений, так называемых липопротеидов. Эти соединения бывают низкой плотности, что по-простому называют плохим холестерином ЛПНП, и высокой плотности, то есть хороший ЛПВП.

Общий, хороший и плохой холестерин

Все говорят о вреде холестерина для человека, и складывается такое впечатление, что чем его меньше в нашем организме, тем лучше. Однако следует знать, что холестерин, очень важен для нормального функционирования всех систем и органов организма человека. Все зависит от уровня этого вещества в крови, от его нормы.

Холестерин принято различать на плохой и хороший. Тот, что оседает внутри стенок артерий, образуя те самый бляшки — это «плохой» холестерин низкой или очень низкой плотности, он соединяется с апопротеинами (особыми видами белка) и образует жиробелковые комплексы — ЛПНП. Опасным для здоровья является повышение уровня именно этого холестерина.

Нормы у женщин и мужчин, а также результаты анализов на холестерин выражаются по различным лабораторным методам в ммоль/л, либо в мг/дл. У здорового человека величина холестерина ЛПНП в норме считается при уровне меньше 4 ммоль/л (160 мг/дл). Превышение этого значения должно рассматриваться как патология, которую следует корректировать диетой или приемом лекарственных средств. А вот стоит ли пить таблетки от холестерина — этот вопрос неоднозначен, поскольку статины не устраняют причину повышения уровня холестерина (сахарный диабет, ожирение, малоподвижный образ жизни), а просто подавляют его выработку организмом и имеют массу серьезных побочных действий.

Многие кардиологи считают, что потенциальная опасность статинов перекрывает возможный риск сердечно-сосудистых катастроф на фоне повышенного холестерина. При ишемической болезни сердца или у лиц, перенесших инфаркт миокарда, инсульт или страдающих стенокардией, этот результат должен быть меньше 2,5 ммоль/л или 100 мг/дл. Люди, не страдающие сердечными заболеваниями, но имеющие свыше двух факторов риска, должны поддерживать уровень этого холестерина ниже 3,3 ммоль/л или меньше 130 мг/дл.

Противостоит плохому холестерину — «хороший» или холестерин липопротеинов высокой плотности ЛПВП. В отличие от белково-жирового комплекса, образующего атеросклеротические бляшки, «хороший» холестерин, выполняет в организме незаменимую функцию, он собирает с внутренних стенок сосудов «плохой» холестерин и выводит его в печень для уничтожения. Атеросклероз сосудов головного мозга (симптомы и лечение) может развиваться не только при повышенном плохом холестерине, но и когда снижен уровень полезного холестерина высокой плотности. Поэтому самый отрицательный вариант при трактовке нормы холестерина у женщин и мужчин является повышенный уровень плохого и низкий уровень полезного холестерина. Именно такое сочетание наблюдается почти у 60% пациентов, особенно в возрасте старше 50 лет.

В отличие от плохого, хороший холестерин вырабатывается только самим организмом, его нельзя пополнить за счет продуктов питания, поскольку с продуктами человек получает лишь плохой холестерин (и тот, только 20-30% с пищей, остальной также вырабатывается организмом). Норма у женщин по «хорошему» холестерину немного отличается от нормы у мужчин, она немного выше. Повышать этот показатель можно только физической активностью — средние и умеренные физические нагрузки на организм способны увеличить его выработку. К тому же, физическая нагрузка снижает накопление вредного холестерина, поступающего с пищей. То есть, если вы приняли пищу с большим содержанием холестерина, что делать? Чтобы помочь организму его вывести — нужна активная работа мышц. Поэтому для увеличения полезного холестерина и снижения вредного (особенно людям, перенесшим инсульт или инфаркт) следует больше двигаться, делать умеренные физические упражнения или интенсивные (если нет противопоказаний).

Увеличить концентрацию хорошего холестерина также возможно приемом небольшого количества крепких спиртных напитков, не более 50 гр. в сутки или один бокал натурального сухого вина. Не больше! Это ограничение касается и очень интенсивных тренировок или чрезмерного физического труда, также как употребление алкоголя — во всем следует соблюдать меру и осторожность. Любое напряжение организма сверх нормы, наоборот, подавляет синтез полезного холестерина в организме. При нормальном состоянии сердечно-сосудистой системы норма холестерина у женщин и мужчин по ЛПВП должна быть больше 1 ммоль/л, или 39 мг/дл.

У больных ишемической болезнью сердца, перенесших инсульт или инфаркт этот уровень должен быть 1-1,5 ммоль/л или 40-60 мг/дл. Также при анализе учитывается концентрация в крови общего холестерина, который состоит из суммы хорошего и плохого холестеринов. Уровень холестерина в крови у женщин и мужчин по показателю — холестерин общий норма — у здорового человека не должно быть больше 5,2 ммоль/л или 200 мг/дл. Если у молодого человека обнаруживается легкое превышение нормы, это следует рассматривать как патологию.

Даже при достаточно высоком уровне холестерина, к сожалению, не бывает особых предупреждающих звоночков, симптомов или признаков, и человек не догадывается о том, что у него сужены (забиты) сосуды и повышен холестерин. Не контролируя норму холестерина женщины и мужчины не задумываются об этом, пока не появится боль в области сердца или не произойдет сердечный приступ или инсульт. Следует регулярно проверять свой уровень холестерина и стараться осуществлять профилактику его роста, во избежании грозных осложнений атеросклероза, приводящих к серьезным заболеваниям.

Причины высокого холестерина:

У большинства людей существует такое убеждение, что уровень плохого холестерина повышается исключительно при злоупотреблении продуктами богатыми холестерином. На самом же деле свыше 70% холестерина синтезируется самим организмом, и только оставшиеся 30% поступают с принимаемой пищей, причем, этот баланс может незначительно изменятся. Некоторые исследования, проводимые учеными в США, показали, что наоборот при диетическом низкохолестериновом питании выработка холестерина печенью повышалась. Поэтому большинство специалистов считают, что:

Ограничение холестериносодержащих продуктов с целью профилактики атеросклероза не оправдано, а соблюдать безхолестериновую диету необходимо только тем пациентам, у кого значительно превышена норма холестерина в крови.

Кроме того, ошибочно полагать, что именно холестерин вызывает заболевания сердечно-сосудистой системы. Высокий уровень холестерина — это показатель — маркер того, что в организме есть серьезные нарушения, хронические заболевания, мешающие нормальному процессу выработки холестерина и способствующие развитию различных сердечно-сосудистых заболеваний. Так от чего повышается холестерин в крови? Причины высокого холестерина следует искать в более глубоких нарушениях в организме человека. К повышению приводят:
- микседема (гипотериоз);
- дефицит соматотропного гормона;
- ожирение;
- курение;
- сахарный диабет;
- беременность;
- наследственные болезни - семейная полигенная гиперлипидемия, семейная комбинированная гиперхолестеринемия, дисбеталипопротеинемия;
- желчекаменная болезнь;
- острый и хронический панкреатит;
- злокачественные опухоли поджелудочной железы и простаты;
- гломерулонефрит, хроническая почечная недостаточность, нефроптоз;
- алкоголизм;
- гипертоническая болезнь;
- инфаркт миокарда;
- ишемическая болезнь сердца;
- применение некоторых медикаментов, таких как оральные контрацептивы, стероидные гормональные средства, диуретики и пр.

По статистике у мужчин уровень холестерина может быть повышенным уже после 35 лет, тогда как у женщин до менопаузы обычно он находится в норме при условии отсутствия патологий ЖКТ. После климакса же у большинства женщин уровень холестерина становится таким же как и мужчин этого возраста. Также большинство специалистов считают, что сидячая работа, малоподвижный образ жизни, отсутствие регулярной физической нагрузки на свежем воздухе, переедание, обилие вредной пищи в рационе — являются определяющими факторами в раннем развитии атеросклероза и причинами высокого холестерина у населения.

Такие вредные привычки, как курение и злоупотребление алкоголем также оказывают отрицательное влияние на организм человека в целом, постепенно вызывая разрушение всех органов и систем, нарушая нормальный обмен веществ, приводя к хроническим заболеваниям и как следствие приводя к повышенному холестерину. Ведь все в человеческом организме взаимосвязано, и нанося вред здоровью никотином, алкоголем, некачественными продуктами питания, перееданием, отсутствием физических тренировок, человек сокращает свою жизнь, увеличивая риск развития атеросклероза, инфаркта, онкологии и прочих грозных, смертельных заболеваний.

Степени повышения холестерина в крови:
5,2-6,5 ммоль/л - легкая степень повышения вещества, зона риска атеросклероза;
6,5-8,0 ммоль/л - умеренное повышение, которое корректируется диетой;
свыше 8,0 ммоль/л - высокий уровень вещества, требующий лекарственного вмешательства.

В зависимости от изменения показателя липидного обмена выделяют 5 клинических синдромов, так называемых дислипопротеинемий. Эти патологические состояния являются предвестниками тяжелых болезней, таких как атеросклероз сосудов головного мозга, сахарный диабет и другие.

Почему снижается холестерин:
- злокачественные опухоли печени;
- цирроз печени;
ревматоидный артрит;
гиперфункция щитовидной и паращитовидных желез;
голодание;
нарушение всасывания веществ;
хронические обструктивные заболевания легких.

Кому нужно контролировать уровень холестерина

Человек, который в общем-то здоров, и не чувствует никаких недомоганий, очень редко задается вопросом, о состоянии своих сосудов, и в частности уровне холестерина. Те же, кто страдает гипертонией - повышенным артериальным давлением, имеет проблемы с сердечно-сосудистой системой, должны следить за уровнем холестерина, чтобы предотвращать его негативное воздействие. Так же озаботиться этой проблемой стоит:
- тем, кто курит;
- лицам с избыточным весом;
- людям с гипертонией;
- лицам с сердечной недостаточностью, заболеваниями сердечно-сосудистой системы;
- людям с малоподвижным образом жизни;
- мужчинам после 40 лет;
- женщинам с периода менопаузы;
- всем пожилым людям.

Чтобы узнать свой уровень холестерина следует сделать биохимический анализ крови. Анализ можно сдать практически в любой поликлинике, для этого берут приблизительно 5 миллилитров крови из локтевой вены. Важно знать, что перед сдачей анализа на холестерин следует ничего не есть 12 часов, ограничить себя в физических нагрузках. Однако, не всегда есть возможность, время и желание каждый раз ходить в поликлинику, брать направление, сдавать анализ. Поэтому можно обзавестись домашним прибором для измерения уровня холестерина с одноразовыми тест - полосками. Он совсем небольшой, и не очень сложен в применении.

Расшифровка анализ крови на холестерин

Узнать, повышен ли у вас уровень холестерина, возможно только с помощью анализа крови. Как мы уже говорили, в результатах биохимического анализа крови будут присутствовать три показателя для холестерина - общий холестерин, холестерин ЛПВП и холестерин ЛПНП. Нормы для каждого из них различны, кроме того, в последнее время стали различать нормы у людей разного возраста, а также нормы холестерина у женщин и нормы холестерина у мужчин. Также следует знать, что не существует точного числа, обозначающего норму холестерина. Существуют рекомендации, в каком диапазоне должен находиться холестерин у здорового мужчины или женщины, отклонение от этого диапазона в большую или меньшую сторону могут быть следствием какого-либо заболевания.

Можно ли доверять результату анализа? В лабораториях наших поликлиник специалистами была оценена точность определения холестерина в крови. В результате получилось, что в 75% лабораторий допускаются погрешности. Поэтому лучше сдавать анализ в сертифицированных лабораториях Всероссийским центром сертификации.

Норма холестерина в крови у женщин

Общий холестерин:
- норма у женщин - от 3,6 до 5,2 ммоль/л,
- умеренно повышенный 5,2 - 6,19 ммоль/л,
- значительно повышен - более 6,19 ммоль/л.

Холестерин ЛПНП: норма 3,5 ммоль/л, высоким считается более 4,0 ммоль/л.

Холестерин ЛПВП: норма от 0,9 до 1,9 ммоль/л, при уровне менее 0,78 вероятность развития атеросклероза повышается в три раза.

Норма холестерина у мужчин

Холестерин общий: норма у мужчин такая же, как и у женщин.

Норма «плохого» холестерина (ЛПНП) у мужчин отличается: 2,25 - 4,82 ммоль/л.

ЛПВП холестерин ("хороший") в крови у мужчин: норма от 0,7 до 1,7 ммоль/л.

Также важную роль в оценке состояния липидного обмена играют триглицериды , их норма для мужчин и женщин примерно одинакова:
Норма триглицеридов у женщин и мужчин: до 2 ммоль/л (менее 200 мг/дл.)
Максимальная, но допустимая норма: до 2,2 ммоль/л (200 - 400 мг/дл.)
Высокий уровень триглицеридов: 2,3 - 5,6 ммоль/л (400 - 1000 мг/дл.)
Очень высокий: от 5,7 ммоль/л и более (свыше 1000 мг/дл.)

Следует иметь в виду, что методики и тесты для определения биохимических показателей в различных медицинских лабораториях могут различаться:
Общий холестерин: норма у мужчин и женщин 3,0 - 6,0 ммоль/л
ЛПНП у женщин: норма 1,92 - 4, 51 ммоль/л, у мужчин 2,25 - 4,82 ммоль/л
ЛПВП у женщин: норма 0,86 - 2,28 ммоль/л.у мужчин 0,7 - 1,73 ммоль/л.

Соответственно могут различаться и лабораторные нормы, поэтому в идеале нужно ориентироваться на нормы той лаборатории, где вам делали анализ. Помните, нормальный уровень холестерина в крови - это здоровье ваших сосудов. Регулировать уровень холестерина, можно при помощи внесения в рацион тех или иных изменений, уменьшая, или увеличивая количество жиров, мясных продуктов и пр. Но все эти изменения, следует согласовывать с врачом.

Коэффициент атерогенности

Существует и такой показатель соотношения в организме холестерина вредного и полезного - это коэффициент атерогенности.

КАТ = (Общий холестерин - ЛПВП)/ЛПВП

2-2,8 - нормальный показатель для молодых людей 20-30 лет;
3-3,5 - обычно бывает у лиц старше 30 лет, но без признаков атеросклероза;
4 и выше - то есть такое преобладание плохого холестерина обычно бывает при ишемической болезни сердца.

Вывод: Чтобы нормализовать жировой обмен, следует стремиться к такому результату анализа:
Общий холестерин до 5 ммоль/л
Коэффициент атерогенности меньше 3 ммоль/л
ЛПНП меньше 3 ммоль/л
Триглицериды меньше 2 ммоль/л
ЛПВП более 1 ммоль/л

Общие методы исследования липидов растительного сырья, а также специальные способы изучения отдельных фракций липидов изложены в ряде руководств (Руководство по методам исследования, техно-химическому контролю и учету производства в масложировой промышленности, разработанное ВНИИЖ, т. I-IV, 1967-1969; Методы анализа жиров Американского общества жировых химиков, 1968, и др.).
При изучении липидов пшеницы и других злаков и их значения для технологических процессов переработки зерна необходимо выбирать такие методы, применение которых не будет препятствовать дальнейшему изучению компонентов, оставшихся после экстракции жиров, т. е. не вызовет необратимых изменений белковых веществ.
Это обстоятельство часто не учитывают при изучении липидов муки хлебопекарного назначения, что может привести к неправильным выводам. Так, наиболее широко применяемым неполярным растворителем является диэтиловый эфир, в отношении которого предполагали, что он инертен для белков.
Недавно были проведены специальные опыты, показавшие, что обработка пшеничной муки этим растворителем приводит в некоторых случаях к значительному укреплению клейковины. Последняя после экстракции диэтиловым эфиром может перейти из группы слабая в группу средняя или даже в группу сильная. Это объясняется тем, что при хранении эфира в лабораторных условиях происходит его автооксидация, и в нем накапливается перекись этила C2H5-О-О-C2H5. Это вещество представляет собой маслянистую жидкость, плохо растворимую в воде и, как и другие перекисные соединения, значительно укрепляющую клейковину.
Во избежание этого побочного влияния, которое может совершенно исказить результаты исследований, необходимо для экстракции липидов из муки или для добавления в нее различных растворимых в эфире веществ применять только свежеперегнанный диэтиловый эфир. Другие растворители, как неполярные, так и полярные, тоже не являются инертными по отношению к белкам клейковины. Так, недавно было показано, что клейковину укрепляют некоторые углеводороды, хлороформ и н-гексанол (рис. 58).

Из полярных растворителей особенно сильное воздействие на свойства клейковины оказывает н-бутанол как безводный, так и насыщенный водой. Обработка муки им снижает во много раз растяжимость клейковины и соответственно увеличивает продолжительность выпрессовывания ее из пластометра.
Следует отметить, что именно насыщенный водой н-бутанол чаще всего применяют для экстракции липидов пшеничной муки и нужно учитывать его влияние на белки клейковины. При необходимости последующего изучения белков муки использование этого растворителя недопустимо.
Общее количество и состав липидов, извлекаемых из зерновки злаков, колеблются в значительных пределах, в зависимости от вида растворителя. Неполярные жидкости - диэтиловый эфир, ацетон, петролейный эфир, бензин, хлороформ - извлекают только около 50-70% всех липидов. Эта фракция обозначается как свободные липиды и состоит главным образом из три-, ди- и моноглицеридов и свободных жирных кислот. Оставшиеся после экстракции так называемые связанные липиды можно извлечь, применяя такие растворители, как этанол, смесь этанола с метанолом, насыщенный водой н-бутанол. Последний экстрагирует из зерна и муки наибольшее количество липидов, разрушая липопротеиновые комплексы.
Хорошим растворителем связанных липидов является реактив Фолча, т. е. смесь хлороформа с метанолом в отношении 2:1. Эту смесь часто применяют и для извлечения суммы липидов. Особое значение имеет то обстоятельство, что метанол практически не влияет на свойства клейковины.
Изменение количества экстрагируемых липидов и соотношения их отдельных фракций в зависимости от растворителя показано в таблице 77. Для экстрагирования суммы липидов муки предложена смесь хлороформа, этанола и воды в соотношении 40:19:1. Этот растворитель извлекает столько же липидов, сколько и насыщенный водой н-бутанол, но менее агрессивен по отношению к белкам, чем последний (табл. 78).

Однако перечисленные растворители удаляют липиды не полностью, часть их все же остается в муке и освобождается только после полного кислотного гидролиза всех ее компонентов. По предложенной ВНИИЖ терминологии эта фракция называется фракцией прочно связанных липидов. Для ее извлечения необходимо подвергать исследуемый материал кислотному гидролизу.
Для специальных целей исследования роли липидов в определении качества клейковины был предложен ферментативный метод извлечения прочносвязанных липидов, о котором говорилось ранее.
Существенное значение для количества извлекаемых липидов имеет температура, при которой проводят их экстракцию. С повышением последней, как правило, растворимость липидов повышается (табл. 79). Однако известно, что повышение температуры может повлечь за собой ускорение всех процессов изменения нативных липидов, их гидролиза или окисления. Поэтому при исследовании структуры отдельных компонентов липидных фракций нежелательно повышать температуру растворителя. В этих случаях экстракцию ведут на холоду (t = 5-20° С) и в бескислородной среде во избежание окисления. Заслуживает внимания также предложенная методика предотвращения окислительных изменений липидов при их экстракции, заключающаяся в добавлении к растворителю 4-метил-2,6-дитретичиого бутилфенола в качестве антиоксиданта. Было доказано, что он препятствует окислению липидов в процессе их извлечения и в то же время может быть легко удален из экстрагированной смеси.

Прогресс в технике исследования липидов за последнее время обусловил возможность применения микрометодов для изучения их. Была разработана методика экстракции и исследования липидов одной зерновки пшеницы (массой около 30 мг) и даже ее половинки. Заслуживает внимания также комбинированный метод исследования липидов пшеницы, позволяющий экстрагировать 3-6 мг материала в специальном экстракторе (рис. 59) и проводить разделение фракций тонкослойной хроматографией. Полученные на хроматографической пластинке фракции затем подвергаются гидролизу, метилируются и полученные метиловые эфиры жирных кислот исследуются методом газо-жидкостной хроматографии. Применение этого микрометода может быть рекомендовано только для однородного материала, например для муки высшего и первого сортов. В противном случае в микронавеску могут попасть сильно различающиеся по содержанию и свойствам липидов частицы зерновки, и получаемые результаты не будут характеризовать весь материал в целом.

При экстрагировании муки полярными растворителями в вытяжку, кроме липидов, переходят и другие вещества, например сахара, от которых необходимо избавиться для дальнейшего исследования собственно липидов.
Получаемые при помощи различных растворителей фракции как свободных, так и связанных липидов не однородны. Ниже представлена схема соотношения основных компонентов липидов, извлекаемых из пшеничной муки.

Разделение и идентификация этих соединений может быть осуществлена различными методами, из которых наиболее широкое применение нашли хроматография на колонках силикагеля и хроматография в тонком слое. Ниже представлена схема получения суммы липидов пшеничной муки последовательным извлечением различными растворителями.

Принципиальная схема разделения липидов на колонке силикагеля предложена Акером в 1974 г.

Модификация метода извлечения и предварительного разделения липидов пшеничной муки, при помощи которой было идентифицировано наибольшее количество компонентов липидных фракций, представлена на схеме далее. Дальнейшее разделение и идентификация отдельных классов липидов может быть осуществлена методом хроматографии в тонком слое силикагеля или на аминоэтилированной бумаге.
Существенное значение для характеристики собственно липидов имеет определение их жирнокислотного состава, особенно содержания непредельных жирных кислот. Именно от присутствия в молекуле жира того или иного количества двойных связей в значительной степени будет зависеть устойчивость продуктов переработки зерна при хранении, их способность к прогорканию. Кроме того, свободные непредельные жирные кислоты оказывают специфическое воздействие на свойства клейковины пшеницы. Для общей характеристики липидов определяют йодное число, характеризующее суммарное содержание двойных связей в молекуле, родановое число, число омыления, т. е. среднюю молекулярную массу жирных кислот, входящих в состав липида, и кислотное число. Последнее имеет особое значение при исследовании зерна и продуктов его переработки, так как гидролиз жира, происходящий при неблагоприятных условиях хранения, обусловливает быстрое повышение кислотного числа, что отражает в определенной степени порчу продукта.
Классическим методом точной идентификации и количественного определения жирных кислот, входящих в состав липидов, является выделение их путем гидролиза, последующее метилирование и разделение полученных метиловых эфиров методом газожидкостной хроматографии.

При экстрагировании липидов извлекают также некоторое количество сопутствующих им веществ, в которых не обнаружено сложноэфирных связей. При омылении жира для определения его жирнокислотиого состава эти вещества находятся в так называемой неомыляемой фракции. В ней можно идентифицировать разнообразные классы органических соединений: алифатические углеводороды с разветвленной или неразветвленной углеродной цепью, алифатические спирты, циклические спирты и гетероциклы. Некоторые из этих веществ обладают характерной окраской (каротиноидные пигменты, хлорофилл), другие отличаются высокой биологической активностью (токоферолы, стерины). В связи с этим при изучении липидной фракции зерна злаков необходимо обращать внимание и на неомыляемый остаток, определяя его компоненты специальными методами, описанными в литературе.

Методы клинической биохимии, используемые для исследования обмена холестерина и триглицеридов, дают возможность оценить содержание в крови каждого из липидов, содержание липидов в липопротеи- нах, а также концентрацию в крови специфических липидтранспортных белков - аполипопротеинов. Исследование этих показателей имеет определенное диагностическое значение и используется для оценки состояния обмена липопротеинов у больных атеросклерозом, выбора соотве- ствующих диетических мероприятий и адекватной гиполипидемической терапии.

Было бы не совсем правильно утверждать, что исследование обмена липидов дает возможность судить о тяжести клинического течения атеросклероза. Однако все же обнаруживается положительная корреляционная связь между выраженностью липидных нарушений и степенью поражения артерий . Особенно четко эта зависимость прослежена при исследовании концентрации аполипопротеинов в крови больных ИБС .
В условиях практики невозможно исследование всего спектра параметров, детально характеризующих липидный обмен. К настоящему времени во всем мире пришли к заключению, что для практической деятельности достаточным является определение трех основных показателей: общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП) и триглицеридов (ТГ). Получив результаты указанных анализов, при помощи несложных расчетов удается определить как минимум 5 липидных показателей, в том числе - количество холестерина в липо-протеинах низкой (ХС-ЛПНП) и очень низкой (ХС- ЛПОНП) плотности. В качестве дополнительных методов исследования может быть использовано определение содержания в крови апо-А- и апо-В- белков .
Мы не ставим перед собой задачу рассмотрения всех технических и методических нюансов лабораторного анализа липидного обмена, так как они подробно освещены в монографиях и руководствах . Поэтому только отметим, что концентрацию липопротеинов в плазме или сыворотке крови оценивают по содержанию холестерина в этих частицах после их фракционирования путем ультрацентрифугирования и (или) осаждения. Иногда дополнительную качественную информацию удается получить с помощью электрофореза липопротеинов.
Внедрение в практику методологии так называемой “сухой химии” привело к разработке портативных анализаторов, с помощью которых в течение нескольких минут можно оценить содержание липидов в капле крови, взятой из пальца, что открывает возможность для быстрого скри- нирующего обследования большого количества людей с целью выявления лиц с гиперхолестеринемией.
В условиях клиники в настоящее время наиболее широко используется хорошо себя зарекомендовавший спектрофотометрический метод оценки концентрации ОХС, ХС-ЛПВП и ТГ. Имея значения этих показателей, содержание в крови ХС-ЛПНП и ХС-ЛПОНП определяют расчетным путем. В основе этого метода лежат два допущения: 1) основная часть ТГ плазмы находится в составе ЛПОНП; 2) весовое отношение ТГ: ХС-ЛПОНП равно 5:1 (молярное отношение - 2,2: 1). При этом надо помнить, что расчетный метод не дает точных результатов при значениях ТГ выше 4,5 ммоль/л. В остальных случаях можно с вполне приемлемой точностью прибегать к следующим вычислениям:

ХС-ЛПОНП (мг/дл) = ТГ (мг/дл) : 5, или ХС-ЛПОНП (ммоль/л) = ТГ (ммоль/л) : 2,2 Тогда ХС-ЛПНП = ОХС - ХС-ЛПВП - ХС-ЛПОНП .
В связи с тем, что в современных публикациях, а также в нашей работе используются разные единицы измерения, считаем необходимым указать коэффициенты перевода величин ХС и ТГ. Так, для перевода показателей в ммоль/л следует разделить значение ХС в мг/дл на 38,5, а значение ТГ в мг/дл - на 88,5. Обратный перевод в мг/дл производится умножением величин в ммоль/л на соответствующие коэффициенты.
При оценке пригодности того или иного количественного метода исследования принимают во внимание два основных критерия. Во-первых, точность, которая представляет собой степень отклонения результатов от истинных значений, и, во-вторых, воспроизводимость, отражающую степень идентичности величин, получаемых при повторных определениях какого-либо компонента в одном образце .
Среди факторов, оказывающих существенное влияние на результаты лабораторных исследований следует иметь в виду категории регулируемых и неуправляемых, но учитываемых, факторов (рис. 3.1). Причем подход к результату лабораторного исследования как к переменной величине, отражающей колебания, происходящие в биологической системе, является принципиально важным для правильной оценки влияния разнообразных факторов, воздействию которых подвержен обследуемый. В част-ности, содержание холестерина в пробе меняется при различных положениях тела; повышается под влиянием АКТГ, кортикостероидов, анаболических препаратов, бромидов, витамина А; понижается при лечении гепарином, галоперидолом, никотиновой кислотой, тиреоидином . Неучтенное влияние этих и подобных факторов может исказить смысл лабораторной информации и вызвать ее ошибочную трактовку.
Учитывая большую индивидуальную вариабельность содержания липидов в крови, в настоящее время считается необходимым как минимум двукратное определение концентрации ОХС, а при пограничном его уровне в первой пробе - даже трехкратный анализ . Следует также принимать во внимание то, что содержание ОХС в плазме и сыворотке крови отличается примерно на 3%.
В то же время из клинических наблюдений хорошо известно, что практически у каждого четвертого больного с документированным атеросклерозом отсутствует гиперлипопротеинемия. В этих ситуациях определение апопротеинов сыворотки крови позволяет выявить нарушение обмена липопротеинов даже при нормальном уровне липидов в крови.
Исследование связей между содержанием апопротеинов и наличием ИБС позволили выявить обратную для апо-А-1 и прямую для апо-В кор-

Рис. 3.1. Основные факторы, влияющие на результаты лабораторных исследований .
реляцию между уровнем этих апопротеинов и развитием коронарного атеросклероза . Весьма любопытно и то, что при коронарном и периферическом атеросклерозе чаще обнаруживается увеличение содержания ОХС, ХС-ЛПНП и апо-В, тогда как у лиц с цереброваскулярными поражениями отмечено снижение ХС-ЛПВП и апо-А-1 .
У больных ИБС определение содержания апо-А-1 и апо-В является важным диагностическим тестом. Так, по данным Н.В.Перовой с соавт. , отношение апо-В/апо-А-1 gt; 1,0 характерно для больных ИБС с атеросклерозом венечных артерий как при наличии дислипопротеинемии, так и при липидных показателях, сохраняющихся в пределах возрастной нормы. Вместе с тем, следует представлять, что изменения в крови

содержания как апо-А-1, так и апо-В не являются абсолютными диагностическими критериями наличия атеросклероза.
В недалеком прошлом, при оценке нормального уровня холестерина, в литературе широко обсуждались региональные особенности липидных показателей. Однако в настоящее время, ссылаясь на данные международной группы экспертов, Р.Г.Оганов указывает, что для всего мира характеристики нормального и повышенного холестерина едины . При этом практически все исследователи называют, с небольшими вариациями, три градации уровня ОХС: нормальный, или желательный - 200 мг/дл (5,2 ммоль/л), умеренно повышенный - до 240-250 мг/д (6,2-6,5 ммоль/л) и высокий - 250 мг/дл (6,5 ммоль/л) и более .
В последнее время накапливается все больше указаний на то, что у больных ИБС желательный уровень холестерина значительно ниже 200 мг/дл. Более того, эксперты Национальной образовательной программы по холестерину США даже не рассматривают ОХС как параметр, используемый для определения у больных ИБС показаний к ги- полипидемической терапии и характеристики ее эффективности, считая необходимым опираться только на исследование ХС-ЛПНП, уровень которого у лиц с признаками коронарного атеросклероза следует снижать до 100 мг/дл (2,6 ммоль/л) и ниже .
Здесь, по-видимому, целесообразно разграничение целей первичной (популяционной) и вторичной (клинической) профилактики атеросклероза в зависимости от индивидуальных особенностей факторов риска и объективных признаков заболевания. При этом определение уровня ОХС оставляется для целей скрининга и первичного выявления лиц с гиперлипидемией, тогда как у больных с явной ИБС целесообразно определять ХС-ЛПНП, апо-А-1 и апо-В уже при первом обследовании .
Таким образом, сегодня задача клинической практики формулируется следующим образом: каждый врач должен знать уровень липидов в крови больного атеросклерозом. Кроме того, имеющиеся данные об изменениях в уровнях и соотношении аполипопротеинов при атеросклерозе свидетельствуют о целесообразности введения определения апо-А и апо-В в практику клинико-биохимических лабораторий нашей страны. Это связано с тем, что в последние годы появляется все больше научных фактов, свидетельствующих о возможности торможения и даже регрессии атеросклеротической бляшки. Эти вопросы будут подробно рассмотрены в следующих главах книги.