Пцр для животных. Пцр-диагностика вирусных и бактериальных инфекций домашних животных

В лабораторной диагностике ветеринарной клиники «Стелла» доступны: ПЦР-комплексы для выявления ДНК возбудителей, вызывающих инфекции, глистные инвазии и болезни кожи у собак и кошек, а также ПЦР-диагностика по определению пола у птиц и выявлению цирковируса птиц. Кроме этого, диагностика хламидиоза/микоплазмоза/уреаплазмоза теперь проводится путем выделения в культуре клеток, что позволяет более рационально подходить к лечению этих инфекций.

ПЦР-комплексы для собак

Стоимость каждого комплекса – от 1500 до 2000 рублей, что значительно дешевле ПЦР-диагностики, проводимой по несколько взятым возбудителям. Время исследования – 1-2 суток.

ПЦР-комплекс респираторный для собак №1 (респираторный коронавирус, вирус парагриппа, чума, стрептококк, стафилококк) – комплексный анализ для выявления инфекционных патогенов у собак с симптомами поражения верхних дыхательных путей (кашель, ринит, коньюктивит, лимфаденит, гипертермия). Актуально для щенков, подобранных на улице или взятых из приютов. Первый этап для диагностики «питомникового кашля», так как он может вызываться любым из перечисленных возбудителей.

ПЦР-комплекс респираторный для собак № 2 (аденовироз, бордетеллез, герпесвирус, хламидиоз, микоплазмоз) – диагностический комплекс на выявление патогенов, наиболее часто вызывающих воспаление верхних дыхательных путей и коньюктивы. Является вторым этапом для диагностики «питомникового кашля», при условии получения отрицательного анализа по комплексу № 1.

ПЦР-комплекс для собак № 3 вирусный (парвовирус, коронавирус, ротавирус, чума, боррелиоз) – этот вид исследования предпочтителен для собак, особенно щенков, с симптомами поражения желудочно-кишечного тракта – диарея, рвота, повышенная температура, резкое исхудание, артрит. Парвовирус и коронавирус

ПЦР-комплекс для собак № 4 инфекции, поражающие печень (токсоплазмоз, бабезиоз, инфекционный гепатит, лептоспироз, гемобартонеллез) – анализ проводится собакам, у которых присутствуют признаки поражения печени – анемия, рвота, диарея, желтушность сдизистых оболочек, признаки гепатомегалии на УЗИ.

ПЦР-комплекс для собак № 5 клещевые инфекции (эрлихиоз 1 тип, тейлериоз, бабезиоз, анаплазмоз) – анализ проводится собакам, у которых в анамнезе присутствуют укусы клещей, анемия невыясненной этиологии, гепатит.

ПЦР-комплекс для собак № 6 клещевые инфекции (гепатозооноз, эрлихиоз тип 2, бартонеллез, боррелиоз – болезнь Лайма) – анализ проводится собакам, у которых в анамнезе присутствуют укусы клещей, анемия невыясненной этиологии, артрит (полиартрит), гепатит, а также вторым этапом после комплекса № 5, когда не удается выяснить причину анемии.

ПЦР-комплексы для кошек

ПЦР-комплекс респираторный для кошек №1 (аденовирус, токсоплазмоз, ринотрахеит, хламидиоз, микоплазмоз) – необходим для выявления патогена, вызывающего конъюктивит, ринит (слезотечение, чихание, кашель). Эти инфекции наиболее часто встречаются у кошек, приобретенных в питомниках и подобранных на улице. При выявлении микоплазмы рекомендуется дополнительно сдать анализ на определение чувствительности к антибиотикам.

ПЦР-комплекс урогенитальный для кошек № 2 (уреаплазмоз, токсоплазмоз, хламидиоз, микоплазмоз, цитомегаловирус) – рекомендуется обследовать кошку перед вязкой, а также кота, во избежание внутриутробного инфицирования плодов. Также обследуется кошка, если вязки были неудачными или ветврач диагностирует цистит, пиометру.

ПЦР-комплекс для кошек № 3 вирусный (иммунодефицит, инфекционный перитонит, лейкемия, гемобартонеллез, панлейкопения) – данный вид комплексного обследования желательно проводить породистым кошкам – британцам и шотландцам, аббисинцам, персидским породам. Но не забываем и про домашних кошек! В каком случае? Если наблюдается диарея неясной этиологии, истощение, анемия, гингивит, дерматит, увеличение объема живота. Очень часто встречается одновременно несколько инфекций.

ПЦР-комплекс для кошек № 4 инфекции слизистых оболочек (вирус паппиломы тип 1 и 2, вирус саркомы, стрептококк и стафилококк) – для диагностики берется смыв, если у кошки образовались паппиломы, язвы или опухоли в ротовой полости (если ветврачом исключена калицивирусная инфекция или терминальная стадия почечной недостаточности).

Общие комплексы для собак и кошек:

ПЦР-комплекс для обнаружения микрофлоры, вызывающей пародонтит (трепонема, актинобациллы, порфирономас гингивалис и другие)– стоматолог может назначить этот вид диагностики, если обнаруживает у животного чрезмерное отложение зубного налета, стоматит, пародонтит, кариес, расшатывание зубов. Выделение возбудителя позволяет правильно назначить лечение и подобрать антибиотики.

ПЦР-комплекс для выявления бактериальной микрофлоры кожи (золотистый стафилококк, стрептококк, кишечная палочка, протей мирабилис) – актуален при дерматитах собак и кошек, хорьков, когда животное длительно страдает и ситуация не позволяет ждать результатов бакпосева.

ПЦР-комплекс для выявления дерматофитов кожи (эпидермофития, трихофития, микроспория, малассезия) – перечисленные грибы являются самыми часто встречающимися патогенами, вызывающими грибковые инфекции кожи (стригущий лишай, атопический дерматит, наружный отит и межпальцевый дерматит). Необходима очень точная дифференциация с помощью ПЦР-диагностики, так как обычный мазок не всегда позволяет это сделать.

ПЦР-комплекс для выявления гельминтов (анкилостомоз, токсокароз, криптоспоридиоз, описторхоз) – очень часто у щенков и котят глистные инвазии протекают скрыто. Животное здорово на вид, хорошо кушает. Яйца гельминтов не всегда выделяются с калом. Поэтому обычный анализ на яйцеглист иногда оказывается ложноотрицательным. В данном случае лучше проводить ПЦР-исследование на наличие гельминтов.

ПЦР- это полимеразная цепная реакция, основанная на принципе копирования определенного участка нити ДНК. За счет многократного увеличения в объеме ДНК-материала, становится возможным обнаружить в микроскопе искомые бактерии. Преимуществом ПЦР является:

высокая чувствительность;
высокая специфичность;
выявление острых и латентных инфекций;
возможность выявления любого из ныне известных возбудителей.

ПЦР в ветеринарии

В настоящее время метод ПЦР диагностики нашел широкое применение в ветеринарии. Данный метод исследования позволяет в короткие сроки получить достоверный ответ. К тому же для его проведения необходимо очень малое количество биологического материала, в отличии, например, от общего анализа крови, что существенно упрощает работу ветеринарным врачам. Как у людей, так и у животных материалом для постановки ПЦР могут быть:

кровь и ее компоненты;
моча;
биоптат желудка;
слюна;
соскобы эпителиальных клеток.

Проведение ПЦР-диагностики кошкам

Во время обследования кошки ветеринаром, для подтверждения или опровержения предполагаемого диагноза может возникнуть необходимость сделать анализ кошке на ПЦР. Причиной назначения такого исследования могут быть наиболее часто встречающиеся и в тоже время трудно диагностируемые заболевания, такие как перитонит, ринотрахеит, коронавирус, токсоплазмоз и др.

Особо тяжелым заболеванием, при котором необходим ПЦР-метод является вирусный иммунодефицит кошек. Этот вирус поражает не только иммунную, но и нервную системы животного. Организм кошки становится ослабленным и беззащитным перед бактериями и вирусами, в результате чего животное погибает от вторичных инфекций. И дабы исключить наличие этого вируса, ветеринарный врач рекомендует проводить кошке полимеразную цепную реакцию.

Данный метод, помимо многообразия преимуществ, имеет ряд недостатков. Все аппараты для ПЦР-диагностики очень чувствительны, и поэтому малейшее его загрязнение может дать ложный положительный ответ. Так же не маловажной считается дороговизна оборудования и реактивов, поэтому не каждая ветклиника в Москве может его приобрести. Однако, диагностика заболеваний без этого метода становится все более затруднительной, поэтому проведение анализа ПЦР у кошек в Москве можно сделать в нашей клинике обратившись по контактным телефонам, или оставив заявку на сайте.

I. Какие анализы надо сдать подобранной на улице кошке или коту?

Строго говоря, назначать исследования должен лечащий врач в зависимости от состояния животного, но грамотный специалист все равно назначит какую-нибудь комбинацию из списка, приведенного ниже. Сдавать анализы я рекомендую даже совершенно здоровым на вид животным. Почему, станет ясно по ходу прочтения этой статьи. А вот у котят до 2-х месяцев брать кровь на анализы, в том числе для проверки на инфекции нет смысла.

Расположим анализы по приоритету:

На панлейкопению (методом ПЦР).
На вялотекущие вирусные инфекции (методом ПЦР).
Общеклинический анализ крови (перед сдачей требуется голодание 4 часа)
Биохимический анализ крови (перед сдачей требуется голодание 8-12 часов).
Анализ мочи. (общеклинический, а также соотношение белок-креатинин).

Рассмотрим подробнее:

Панлейкопения или чума кошек (парвовирусная инфекция). Самое заразное и смертоносное заболевание кошек. Не передается людям и другим видам животных. При отсутствии лечения часто приводит к смерти, особенно котят. Вакцинация импортным препаратом, ежегодно проводимая по всем правилам (с двойной дегельминтизацией) эффективно защищает от этой болезни. Поэтому, если у Вас дома есть непривитые кошки, то анализ крайне важен. Но даже если у Вас дома нет других кошек или они привиты — я все равно настоятельно рекомендую сдать этот анализ.

Даже совершенно здоровое на вид животное может быть носителем этого опаснейшего вируса (инкубационный период составляет от 4-х до 21 дня) и если анализ обнаружит вирус, врачи смогут предпринять соответствующие меры, чтобы смягчить протекание болезни. Пока результат не получен, рекомендую соблюдать .

Анализы на вялотекущие инфекции. Наиболее распространены 4 инфекции: вирусный лейкоз кошек, иммунодефицит кошек, вирусный перитонит кошек (ФИП) и коронавирус (вирусный энтерит). Не передаются человеку и другим видам животных. Сдача анализов крайне необходима, если у вас есть свои кошки (причем неважно, привиты они или нет, т.к. эффективных прививок от этих вирусов не существует). Если других кошек в квартире нет, то все равно желательно знать о наличии вируса в теле животного т.к. эти инфекции могут “дремать” годами без каких-либо видимых проявлений, но активизироваться в случае стрессового воздействия на организм (от сильного глистогонного препарата до наркоза при операции) и перейти в острую стадию. Эффективного лечения лейкоза, иммунодефицита и ФИП в острой стадии нет. Существует поддерживающая терапия, но и она не всегда эффективна. Пока результат не получен, рекомендую соблюдать .

Стоимость анализа методом ПЦР (рекомендую только этот метод) 300-600руб без учета стоимости забора крови за каждый (мазка из прямой кишки), в зависимости от лаборатории или клиники. Результат через 1-3 суток, также в зависимости от лаборатории. Некоторые лаборатории объединяют эти анализы в один т.н. профиль, что дает возможность сэкономить деньги. Например, лаборатория Нуклеом, через ветклинику Зооакадемия, предоставляет возможность сдать анализы на вялотекущие инфекции методом ПЦР в составе профиля за 900руб (причем туда НЕ входит, коронавирус, который рекомендуется сдать дополнительно за 300р, зато включена панлейкопения (!) и добавлен гемобартонеллез). На сегодняшний день, это самое выгодное из известных мне предложений по Москве. В других лабораториях и ветклиниках подобное исследование может обойтись в 2 раза дороже.

Общеклинический анализ крови. Перед сдачей необходимо голодание 4 часа. Очень информативен для врачей. Расскажет об острых состояниях, например, о воспалительных процессах в организме, и поможет врачу правильно подобрать препараты для лечения, если возникнет необходимость. Подтвердить или опровергнуть результаты исследований №1-2. При этом стоит недорого 300-600руб (без учета стоимости забора крови), поэтому строго рекомендуется к сдаче, при любом заборе крови, например, для исследований №1-2.

Биохимическое исследование крови. Перед сдачей необходимо голодание 8-12 часов. Покажет состояние внутренних органов и поможет врачу назначить правильное лечение при необходимости. Также как и исследование №3 анализ может помочь в подтверждении результатов исследований №2. Представляет собой набор показателей, поэтому стоимость варьируется в зависимости от их количества и от лаборатории. Как правило, нет необходимости ломать голову на тему, какие показатели сдавать т.к. любая лаборатория объединяет их в специальные профили. Можно сдать стандартный или расширенный. Стоимость варьируется в зависимости от клиники и лаборатории. Стандартный профиль стоит от 900р, расширенный от 1 200р без учета стоимости забора крови.

Важное замечание. Нет смысла сдавать биохимию крови: а) беременным, б) котятам до 4-х месяцев, в) ранее одного месяца после операции с наркозом! Результат будет сильно искажен и может ввести в заблуждение врача, который назначит ненужное лечение.

Анализ мочи. 5.1. Общеклинический. 5.2. Соотношение белок/креатинин.

Самое сложное по части получения материала исследование. Зато для его сбора не надо вести животное в клинику. Очень важное исследование, которое может выявить на ранней стадии проблемы с почками или признаки мочекаменной болезни, чего никогда не сможет показать исследование №3. В то же время в нем нет такой срочности, как в исследованиях №1-3. Мочу необходимо собирать в чистый(!) лоток. Можно использовать специальный набор для сбора мочи (стоимость 300-400р), представляющий собой гранулы, не впитывающие жидкость, и контейнер для мочи. Для сбора мочи из лотка также можно использовать обычный шприц (20 мл) без иглы. Транспортировать в лабораторию или ветклинику можно также в нем. Необходимые соблюдать некоторые условия. Анализ не должен храниться более 5-ти часов с момента сбора до момента помещения в лабораторное оборудование. Храниться и транспортироваться он должен в холоде. При транспортировке рекомендую использовать термопакет и хладогент. Если у Вас нет хладогента, то можно использовать замороженные овощи J. Средняя стоимость — около 600р.

II. Где сдавать анализы?

А) Можно в клинике, совместив с первичным приемом врача. В любом случае Вам придется идти к врачу с результатами анализов, т.к. интерпретация анализов №3-5 требует врачебной квалификации.

Б) Напрямую в специализированных лабораториях. В этом случае Вам придется самим решать что сдавать, а что нет.

При этом, многие ветклиники имеют собственные лаборатории, способные проводить исследования №3-5, в то время как исследования на вирусы требуют более дорогостоящего оборудования, поэтому клиники, не имея его, отправляют забранный материал в специализированные лаборатории, с которыми они сотрудничают. Наиболее известные лаборатории в Москве (по алфавиту): Веттест, Неовет, Нуклеом, Пастер, ЦМД (звенигородское шоссе), Шанс био (сеть). С какими лабораториями сотрудничает конкретная ветклиника (желательно, чтобы их было более одной), а также стоимость анализов рекомендую узнавать заранее. Как правило, во всех лабораториях имеется высококачественное оборудование, но качество полученных результатов, к сожалению, сильно зависит от человеческого фактора. Так что это в какой-то степени лотерея, и порой приходится пересдавать анализы в разных лабораториях, чтобы подтвердить или опровергнуть тот или иной результат.

О правилах читайте в отдельной статье.

Инфекционный перитонит кошек – системная вирусная болезнь (Coronavirus) , которая поражает многие ткани организма. Определены две формы болезни: влажная и сухая. При влажной форме, воспалительная жидкость аккумулируется в абдоминальной полости. При сухой форме, вирус атакует различные органы, такие как почки и селезенка. Нет лечения для данной болезни и почти всегда исход фатальный. ИПК наиболее часто диагностируется у котят и взрослых кошек до 3х лет. Кошки в питомниках или в домах с несколькими животными имеют наивысший риск развития болезни.

Дополнительная информация
ИПК системная вирусная болезнь, характеризующаяся скрытым началом, периодической неконтролируемой лихорадкой, пиогранулематозной реакцией, аккумулирование экссудата в полостях тела, высокой смертностью.

Патофизиология
Вирус ИПК реплицируется локально в эпителиальных клетках респираторного тракта или орофарингса. Вирусные тела начинают вырабатываться, и вирус поглощается макрофагами. Вирус транспортируется макрофагами/моноцитами по организму, локализуясь в стенках различных вен и периваскулярного пространства. Локальная периваскулярная репликация вируса и последующая пиогранулематозная реакция со стороны тканей образует характерную картину поражения при ИПК.

Поражаемые системы

Мультисистемная – пиогранулематозные или гранулематозные повреждения происходит в сальнике, на серозных оболочках органов брюшной полости, таких как печень, почки, кишечник, в абдоминальных лимфатических узлах, и подслизистом слое кишечника.
Респираторная – поражения на поверхности легких, плевральный выпот при влажной форме ИПК.
Нервная – васкулярные поражения проявляются на всем протяжении ЦНС, особенно, на оболочках
Офтальмологическая – повреждения могут проявляться увеитом и хореоретинитом.

Генетическая предрасположенность
Нет.

Распространенность
Распространенность антител против коронавируса кошек (вируса ИПК, КВК, FCoV) высокая в большинстве популяций, особенно там, где много кошек содержится совместно. Инциденты клинического проявления болезни низки в большинстве популяций, особенно у кошек, которые содержаться одни. Из-за трудности в диагностике, контроле и профилактики вспышка ИПК в гостиницах для кошек может стать катастрофой.

Признаки инфекционного,вирусного перитонита кошек (ИПК, ВИПК, FIP)

Домашние кошки и экзотические кошки предрасположены к инфекции ВИПК.

Породная предрасположенность
Некоторые семьи или линии кошек проявляют большую предрасположенность к развитию клинической формы болезни после инфицирования ВИПК. Среди экзотических кошек, гепарды особенно предрасположены к развитию фатального ИПК.

Средний возраст и диапазон
Высокая распространенность ВИПК проявляется у котят в 3 мес. до 3 лет. Распространенность снижается после достижения кошкой 3 лет.

Половая предрасположенность
Нет

Анамнез
Общие комментарии
Широкий диапазон признаков может проявиться в зависимости от вирулентности и патогенности штамма вируса вовлеченного в процесс, эффективности иммунной системы хозяина и поражаемых систем. Различают две классические формы болезни, влажная, с выпотом экссудатов в полости тела и сухая, которая поражает различные органы.
Анамнез

Имеется скрытое начало
Постепенное истощение снижение аппетита
Остановка в росте
Постепенное увеличение объема живота, развитие водянки, асцита, пузатый вид животного
Постоянная лихорадка без ответа на антибиотики

Результаты физикального обследования

Депрессия, низкорослость
Плохое общее состояние – потеря веса и плохое состояние шерсти
Абдоминальные и плевральные выпоты
Пальпация может выявить абдоминальные массы (гранулемы или пиогранулемы) на сальнике, на поверхности внутренних органов, особенно почек, и на кишечных стенках. Мезентеральные лимфатические узлы могут быть увеличены.
Глаза: , изменение цвета радужки, неправильная форма зрачка.
Неврологические признаки могут включать различные варианты.

Причины
ВИПК вызывается одним из двух типов коронавируса кошачьих. Большинство инфекций, возможно 85%,вызываются типом 1 вируса (FCoV-1), остальные типом 2 (FCoV-2). Очень важно проводить различие между двумя биотипами вируса, менее вирулентные и авирулентные кишечные виды вируса (кишечный коронавирус кошек или КККВ) и вирулентными видами, которые приводят к возникновению ВИПК. В действительности, ВВВК и в ВИПК могут становиться как типом 1 так и типом 2. В каждом типе есть спектр вирулентности из авирулентных вирусов, которые образуют асимптоматические инфекции и фатальное поражение ВИПК.

Факторы риска

Вступление FCoV-антителпозитивныной кошки в популяцию FCoV-антителнегативных кошек (незащищенных антителами против ВИПК)
Кошки, содержащиеся группами

Диагностика ВИПК

Влажная форма ВИПК может быть легко выявлена клиническим путем, тогда как сухую форму сложно точно диагностировать. Нет ни одного лабораторного теста для диагностики ВИПК, потому что болезнь вариабельно от случая к случаю.

Дифференциальный диагноз

Лихорадка неизвестного происхождения. Этот диагноз можно поставить когда отвергнуты все другие возможные причины гипертермии.
Болезни сердца вызывающие плевральный выпот. Это выпот буде иметь низкую относительную плотность и количество клеток в сравнении с высокой плотностью и огромным содержанием клеток при ВИПК выпоте.
Повреждения при лимфоме, особенно почек, могут быть сходными с ВИПК при пальпации. Опухоли ЦНС могут проявлять признаки подобные тем, что и при ВИПК. Большинство кошек с позитивным тестом на ВИПК-антиген. У кошек с негативным результатом теста, биопсия мест поражения (при возможности) должны подвергаться гистопатологическому или иммунохимическому анализу на ВИПК-антиген.
Респираторные болезни, вызываемые калицивирусом кошек и герпесвирусом кошек, хламидиями или различными бактериями.
Панстеатит (болезнь желтого жира). Боль при пальпации живота, и диета только из рыбы.
Панлейкопения, вызывающая энтерит. Количество лейкоцитов должно быть низким.
Диагноз
Это заболевание подозревается при отсутствии ответа лихорадки на введение антибиотиков, наличию экссудатов в грудной и перитонеальной полостях без явных инфекционных агентов, гиперглобулинемии и повышенным содержанием белка в выпоте при влажной форме.
Сердечная недостаточность, лимфосаркома и разрыв лимфатических протоков и т.п. болезни с признаками выпота в грудную и брюшную полости должны быть внимательно учтены и проверены, как и лейкемия кошек, вирусный иммунодефицит кошек и панлейкопения кошек.
По различным причинам изоляция вируса не практична.
Серологические процедуры: некоторые диагностические лаборатории не могут проводить тесты на ВИПК из-за сложности интерпретации результатов. ВИПК позитивный результат иммунофлуорересцентного анализа (ИФА) говорит лишь только о том, что животное имело контакт с вирусом, не подтверждая наличия вируса. Однако, существует насколько свидетельств что многие серологически позитивные кошки избавились от коронавируса возможно в респираторном или желудочно-кишечном тракте. Положительные тесты с использованием ИФА или ELISA не дают гарантированного диагноза на ВИПК.
Позитивный результат теста ИФА на ВИПК (титр 1:50 до 1:6000) вместе с клиническими признаками ВИПК говорит о верном проявлении ВИПК. Хотя и необычно, но некоторые кошки с проявлением признаков ВИПК имеют отрицательный результат на серологическое исследование.

ИФА (иммуноферментный анализ)предпочитается многими диагностическими лабораториями, чем ELISA.

Диагностические наборы для ИФА и ELISA диагностики доступны для использования на коронавирус кошек, но результаты необходимо интерпретировать с осторожностью.
Общий белок, определяемый электрофорезом, заметно повышен.
Позитивный результат окрашивания образцов (из легких, печени, почек, лимфатических узлов брыжейки и плевры) специфическими флуоресцирующими антителами на ВИПК считается окончательным диагнозом. Кишечный коронавирус перекрестно реагирует на тест к ВИПК.
При жизни у животных в крови можно обнаружить тяжелую анемию, нейтрофилию и лейкопению.
Так же коммерчески доступно ПРЦ исследование для оказания помощи в идентификации вируса в различных тканях.

Анализы крови и мочи

Кошки с ВИПК имеют тенденцию к развитию лейкопении на ранней стадии инфекции, но позднее развивается лейкоцитоз с нейтрофилией и лимфопенией.
Может выявляться анемия различной степени тяжести – от средней до тяжелой.
Обычно заметно повышение уровня общего плазменного глобулина.
Часто присутствует и гипербилирубиурия.

Лабораторные тесты

Тест на сывороточные антитела определяют антитела против коронавирусов кошек. Позитивный результат не является диагностическим, и предпочтительнее показывает предыдущую инфекцию ВИПК. Корреляция между верхним значением титра и потенциального подтверждения ВИПК не велико.
ПЦР (полимеразная цепная реакция) позволяет определить вирусный антиген. Точность позитивного теста коррелирует с клиническим проявлением болезни.
Иммуногистохимическое исследование (иммунопероксидазой) доступно для определения ВИПК антигена в определенных клетках в гистопатологических образцах кошек при посмертном исследовании с фатальной формой болезни и образцах биопсии. Это тест является прекрасным для подтверждения ВИПК.

Визуальные методы диагностики обычно не требуются, но могут помочь в обнаружении абдоминально и плеврального выпота, а также пиогранулематозных повреждений.
Жидкость при влажной форме ВИПК также может обнаруживаться и в брюшной полости (асцит).
УЗИ дает дополнительную информацию, которую нельзя получить при помощи рентгенографии. В данном случае, увеличенные лимфатические узлы в центре кишечника.

Рентгенограмма: 1 . Диффузное затемнение в нижней части грудной клетки из-за плеврального выпота, из-за чего границы сердца 2 не видны, а легкие 4 сдвинуты к позвоночнику и мало вентилируются, 3 – трахея, 5 – печень, 6 – желудок, 7 – кишечник

Другие диагностические процедуры

Жидкость, полученная из грудной и брюшной полостей, бледного или соломенного цвета, тягучая, часто с вкраплениями фибрина, а после отстаивания в ней оседают сгустки. Специфическая плотность такой жидкости обычно высокая (1.030-1.040).
Лапароскопия может быть полезной для обнаружения специфических повреждений в брюшной полости и получения образцов тканей для гистопатологического и иммунохимического подтверждения.
Диагностическая лапаротомия может выявить истину, если есть трудность в постановке диагноза и если лапароскопия недоступна.

Внешние и гистопатологические изменения

Мониторинг за пациентом
У кошки с ВИПК необходимо контролировать скопление экссудата в плевральной полости.

Профилактика

Имеется в продаже MLV интраназальная вакцина против ВИПК. Однако, эффективность дано вакцины низкая, следовательно на ней нельзя целиком полагаться в вопросе контроля ВИПК.
Главный способ передачи ВИПК – от кошек асимптоматических вирусоносителей котятам в возрасте 5-7 недель, когда колостральный иммунитет начнет ослабевать. Следовательно, ранний отъем котят в возрасте 4-5 недель с выращиванием котят изолированных от прямого контакта с другими кошками включая матерей, прервет цикл передачи вируса от матери к потомству.
Обычная дезинфекция мест обитания кошки и средств по уходу и кормлению быстро инактивирует вирус и уменьшает риск передачи от кошки к кошке.
Только FCoV- антител негативные кошки должны вводиться в питомник или колонию кошек как гарантия свободы организма от вируса. Вакцинация может делать кошек антител-позитивными и может затруднить контроль вируса в популяции.

Возможные осложнения
При плевральном выпоте необходим торакоцентез, как средство лечения.

Ожидаемый курс и прогноз
ВИПК может запустить проявление клинических признаков в течение нескольких дней или нескольких месяцев. Прогноз смертельный после проявления типичных признаков ВИПК инфекции, достигая 100% смертности.

Клинические признаки, типично проявляющиеся при данной болезни.

Снижения вольтажа на ЭКГ, затухание комплексов и низкая амплитуда.
Приглушение сердечных тонов
Тахикардия, учащение пульса
Растяжение брюшной полости
Анорексия, сокращение или потеря аппетита
Асцит
Снижение объема фекалий, запор, отсутствие фекалий
Диарея
Дисфагия
Гепатоспленомегалия, спленомегалия, гепатомегалия
Полифагия, избыточный аппетит
Аномальное проприорецептивное позиционирование
Атаксия, дискоординация, падание
Цианоз
Дегидратация
Дисметрия, гиперметрия, гипометрия
Непереносимость физической нагрузки
Лихорадка
Хромота передних конечностей
Генерализованная диагностика
Генерализованная слабость
Слабость в области головы, шеи, парез, паралич
Гемипарез
Хромота задних конечностей
Массы в брюшной полости
Недостаток роста
Лимфаденопатия
Опистотонус
Бледность кожи и слизистых оболочек
Полидипсия
Припухлость в области препуция, семенников, пениса, мошонки
Тетрапарез, слабость, паралич 4х конечностей
Дрожь, тремор, фасцикуляция
Потеря веса
Аномальное поведение, агрессия, изменение привычек
Аномальные рефлексы передних конечностей, усиление или уменьшение
Аномальные рефлексы задних конечностей, усиление или уменьшение
Кружение
Дезориентация, потеря памяти
Тупоумие, депрессия, летаргия
Делириум, бред, мания, возбуждение
Гипоэстезия передних конечностей, анестезия
Наклон головы

Гиперестезия, гиперактивность
Гипертония мышц, миотония
Гипотония мышц
Пропульсия, бесцельное брожение
Судороги или обмороки, конвульсии, коллапс
Тремор
Аномальный рефлекс зрачка на свет
Аномальная рефлективность сетчатки
Аномальный размер сосудов сетчатки
Анизокория
Блефароспазм
Слепота
Хемоз, отек конъюнктивы, роговицы
Аномальная васкуляризация конъюнктивы и роговицы
Краснота конъюнктивы, роговицы
Отек роговицы
Паннус
Гифема, «черный глаз»
Гипопион
Слезотечение
Миоз, сокращение зрачка
Мидриаз, расширение зрачка
Нистагм
Помутнение стекловидного тела
Атрофия зрительного нерва, сокращение размеров зрительного нерва
Гнойные истечения из глаз
Отслоение клетчатки
Складки и бугры на сетчатки
Кровоизлияния сетчатки
Синехии
Боль спины
Боль шеи
Боль от внешнего давления на брюшную полость
Аномальный размер семенников
Кашель
Притухание легочных звуков
Диспноэ
Тахипноэ
Слизистые носовые истечения, серозные, водянистые
Гнойные носовые истечения
Грубость и неопрятность шерсти
Глюкозурия
Кетонурия
Полиурия

Лечение

В зависимости от тяжести протекания болезни животное должно проходить лечение либо стационарно или амбулаторно, желания и возможности владельцев обеспечить хорошее поддерживающее лечение.

Активность
Активность животного необходимо сократить для уменьшения распространения вируса к другим кошкам.

Диета
Анорексия и потеря веса – лавные проблемы при ВИПК. Любая диета, которая побудит животное к приему пищи, приветствуется.

Обучение владельцев
Обсудите различные аспекты ВИПК. Включая фатальный прогноз при окончальтеной постановке диагноза.

Хирургические аспекты
Нет

Лекарственные препараты

Нет препаратов для эффективного лечение ВИПК. Кошки с генерализованной инфекцией ВИПК почти всегда погибают.
Иммуносупрессивные препараты, такие как преднизолон и циклофосфамид применяются с ограниченным успехом. Кортикостероиды как субконъюнктивальные инъекции эффективны только при офтальмологическом проявлении болезни.
Интерфероны, хотя и эффективны in vitro, имеют ограниченный успех в лечении ВИПК. Рекомбинантный интерферон по оценкам имел некоторый успех в лечении ВИПК в Японии.
Антибиотики не эффективны, поскольку вторичные бактериальные инфекции не являются частью клинического проявления болезни.

Противопоказания
Нет

Предостережения
Нет

Возможные взаимодействия
Нет

Альтернативные препараты
Нет эффективных противовирусных лекарств против ВИПК.

Прогноз
ВИПК проходит клиническое проявление в течение нескольких дней до нескольких месяцев. Прогноз смертельный при проявлении характерных клинических признаков, смертность 100%.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - метод молекулярной диагностики, ставший для многих инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Высокая чувствительность и специфичность метода позволяют гарантированно обнаруживать единичные возбудители в биологическом материале на основе их генетической информации. Аналитическая чувствительность ПЦР для большинства вирусов и бактерий составляет 1000 микроорганизмов в 1 мл пробы. Специфичность ПЦР для вирусных, хламидийных, микоплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%.

Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Основные принципы ПЦР открыл в 1983 году американский химик Кэри Б. Мюллис, за что и был удостоен Нобелевской премии.

ПЦР-анализ состоит из нескольких этапов. Первый этап - пробоподготовка - заключается в обработке исследуемого материала (приготовление суспензии, центрифугирование). На втором этапе проводится выделение наследственного материала - ДНК или РНК - из клеток. При этом после лизиса клеток и разрушения комплекса «ДНК-белок» производится осаждение ДНК или РНК на сорбенте с последующим переходом их в элюирующий буфер. На третьем этапе проводится амплификация, то есть умножение количества специфических участков ДНК. Для этого используются тест-системы, в состав которых входят праймеры - олигонуклеотиды, которые являются специфическими для каждого возбудителя. К разлитой в микропробирки ПЦР-смеси добавляют образцы и контроли, которые помещают в амплификатор или термоциклер - программируемый термостат с высокой скоростью и точностью задаваемой температуры. Процесс амплификации заключает в себе три стадии: денатурация, отжиг и элонгация. При определении в клинических образцах РНК-содержащих вирусов амплификации предшествует стадия обратной транскрипции, при которой РНК переводят в форму ДНК с использованием фермента обратной транскриптазы, или ревертазы. Четвертый этап ПЦР-диагностики заключается в проведении электрофоретической детекции продуктов ПЦР - ампликонов. При этом продукты ПЦР помещают в лунки агарозного геля и подвергают действию постоянного электрического тока, в результате чего отрицательно заряженная молекула ДНК движется к положительному электроду. В состав геля входит бромид этидия, который, образуя устойчивый комплекс с ДНК, делает эти полосы хорошо заметными при просмотре под ультрафиолетовым облучением (рис. 1).

Рис. 1. Стадии ПЦР

Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР-анализа необходимым условием является соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.

Взятие материала для ПЦР-исследования следует проводить в одноразовых неталькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). При взятии соскобов и смывов следует пользоваться одноразовыми стерильными зондами с повышенной адсорбцией (имеющими на конце щеточку), так как они отбирают оптимальное количество материала.

Соскобы и смывы со слизистых оболочек носа, ротовой полости, влагалища, конъюнктивы отбирают в одноразовые пластиковые микропробирки - эппендорфы - объемом 1,5 мл, в которые разлито по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Желательно не использовать зонды с ватными наконечниками. Следует также избегать отламывания кончика зонда в пробирку с физиологическим раствором, так как это затрудняет дальнейшую обработку и повышает риск перекрестной контаминации проб. Для получения необходимого количества материала достаточно вращать зонд в пробирке в течение 1-2 минут, избегая разбрызгивания жидкости. Проба должна быть мутной на вид, а при отстаивании в ней должен образовываться небольшой осадок.

Забор крови проводят одноразовой иглой в одноразовый шприц или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц, кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Возможно использование вакуумных систем («Vacuette») для забора крови. Для исследования можно предоставить сыворотку крови: пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка, затем центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 минут и переносят в количестве не менее 1 мл в стерильные эппендорфы объемом 1,5 мл.

Сперму отбирают в стерильные одноразовые пробирки или флаконы.

Моча. Отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-40 мл в стерильный сухой флакон или пробирку.

Фекалии. Отбирают пробы массой 1-3 грамма из предварительно продезинфицированного и вымытого лотка, одноразовыми лопаточками переносят в стерильный флакон.

Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры или в чистые стеклянные или пластиковые емкости.

Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом. При хранении материала более суток его необходимо заморозить при Т минус 20°С.

Наиболее часто встречающимися заболеваниями у кошек и собак являются конъюнктивит, ринотрахеит, а также энтерит. Для того чтобы выяснить этиологию заболевания, требуется провести качественную лабораторную диагностику.

Причиной коньюнктивитов или инфекций верхнего респираторного тракта у кошек может быть инфицирование следующими микроорганизмами: герпесвирус типа 1 (FHV1), калицивирус кошек, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococ-cuc aureus, Brohaemolytic streptococcic и Salmonella tephimurium.

Наиболее частой причиной, по данным различных авторов и методов исследования, являются герпес-вирус типа FHY1 (от 10% до 34%) и калицивирус кошек (от 20% до 53%). Chlamydia pcittaci (от 10% до 35%).

Герпесвирусная инфекция , ассоциирована абортами, высокой смертностью новорожденных (инфицирование почти 60% случаев) с признаками интерстициальной пневмонии.
Калицивирус - тяжело протекает у котят, в то же время 25-80% переболевших взрослых животных становятся носителями и являются источником заражения, передавая вирус через слюну.

Панлейкопения - контагиозное вирусное заболевание кошек, характеризующееся резким падением уровня лейкоцитов, гастроэнтеритом, ринитами с конъюнктивитами, высокой смертностью (30-90 % заболевших котят).

Настоящим бичом для питомников является инфекционный перитонит кошек - тяжелое заболевание, возбудителем которого является РНК-содержащий высокопатогенный вирус. Вирус реплицируется в миндалинах и энтероцитах тонкого кишечника, рассеиваясь по организму через макрофаги и моноциты. Коронавирусы с низкой вирулентностью вызывают энтериты средней тяжести, чаще всего у котят после отъема от матери. Высоковирулентный коронавирус может привести к развитию сухого или выпотного перитонита. Перитонит часто сопровождается почечной недостаточностью, печеночными и неврологическими симптомами.

При инфицировании аденовирусами обоих типов и вирусом чумы плотоядных у собак проявляется общий комплекс симптомов: лихорадка, конъюнктивиты и ринотрахеиты, расстройство желудочно-кишечного тракта, поражение нервной системы.

При чуме плотоядных клинические признаки могут включать серозно-слизистые назальные и конъюнктивальные выделения, кашель, одышку, пневмонию, рвоту и понос, а также лихорадку и гиперкератоз.

Аденовирус плотоядных . Возбудитель - ДНК-содержащий аденовирус плотоядных первого типа (вызывает инфекционный гепатит плотоядных) и второго типа (вызывает аденовироз собак). Наблюдаются лихорадка, апатия, анорексия, жажда, рвота и понос, болезненность брюшной стенки при пальпации. Иногда развиваются конъюнктивит, кератит, светобоязнь. Могут быть точечные кровоизлияния на слизистой оболочке и коже. Редко наблюдаются неврологические нарушения.

Все перечисленные заболевания имеют высокий индекс контагиозности и ассоциированы с высокой смертностью среди щенков, от парвовирусного энтерита погибает 10-50% заболевших щенков, при инфицировании не вакцинированных щенков вирусом чумы плотоядных смертность доходит до 100%.

Токсоплазмоз . Возбудитель - простейшее Toxoplasma gondii. Размножение возбудителя происходит у кошек на стенках кишечника. С калом они выделяют во внешнюю среду ооцисты.

Тканевые цисты могут вызывать анорексию, угнетение, кератиты, желтуху, рвоту, понос и неврологические симптомы в зависимости от пораженных органов. У собак клинические симптомы зависят от пораженных органов: могут наблюдаться неврологические нарушения (тремор, атаксия, паралич) или токсоплазмозный миозит (нарушение походки, атрофия мышц, ригидность), а также миокардит и гепатит.

Хламидиоз и орнитоз . Возбудители у кошек - Chlamydophila felts, у собак - Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, у тех и у других заболевание может вызывать Ch. psittaci. У птиц - Ch. psittaci.
У кошек заболевание проявляется в основном в форме гнойных и негнойных конъюнктивитов и кератитов, также могут наблюдаться ринит, пневмония, вагинит, аборты и бесплодие. У котят встречается неонатальныи хламидиозный конъюнктивит. У собак симптомы разнообразны и проявляются воспалительными заболеваниями конъюнктивы, половых органов, гастритами, артритами, абортами и бесплодием. Есть данные о роли хламидий в патогенезе атеросклероза у собак.

Микоплазмоз . Возбудители - микроорганизмы рода Mycoplasma. Протекает с признаками бронхопневмонии, кератоконъюктевитов и кератитов.

Вирусный иммунодефицит кошек. Иммунодефицит кошек - тяжелое заболевание, вызываемое вирусом из семейства Retrovoridae, рода Lentivirus. Вирус поражает иммунную и нервную системы. Обладает тропизмом к Т-лимфоцитам. В результате иммунодепрессии организм становится беззащитным против бактерий, грибов, вирусов и погибает от вторичной инфекции.
Клинические признаки развиваются медленно, и заболевание чаще регистрируется среди кошек 6-10 лет.

Встречаются у домашних животных и такие заболевания как: лептоспироз собак, листериоз кошек и собак, иерсиниоз щенков, бруцеллез, ротовирусный энтерит, бешенство.

Правильность постановки ПЦР-анализа и качественное выделение инфекции зависит, в первую очередь, от правильности взятия материала, во-вторых, от соблюдения температурного режима хранения и транспортирования проб. Поступившая в лабораторию проба регистрируется, проходит все стадии ПЦР, подвергается электрофоретической детекции с последующей выдачей конечного результата.

Таким образом, высокая чувствительность и специфичность ПЦР-метода позволяет гарантированно обнаруживать единичных возбудителей в биологическом материале за короткий промежуток времени, что позволяет поставить точный диагноз, назначить адекватное лечение и разработать профилактические мероприятия.

И.М. Донник, член-корреспондент РАСХН, д.б.н., профессор, Н.А. Пелевина, м.н.с, О.Г. Бодрова, м.н.с,
ГНУ Уральский государственный научно-исследовательский ветеринарный нститут РАСХН